宁夏地区苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因突变谱的研究

摘要

目的：苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)是一种较常见的遗传性代谢病,由苯丙氨酸羟化酶(phenylalaninehydroxylase,PAH)基因突变导致PAH活性降低或丧失,苯丙氨酸(phenylalanine,Phe)在肝脏中代谢紊乱所致。PKU在我国发病率约为1/11144,而宁夏地区的发病率约为1/3065,明显高于国内平均水平,这可能与宁夏地区独特的地理位置和民族构成有关。由于宁夏地区经济水平相对滞后,PKU诊断后的治疗率相对较低,大部分患儿得不到及时的诊治,导致高苯丙氨酸血症和智力低下。本研究旨在分析宁夏地区PKU患者PAH基因突变分布特征,了解其热点突变位点及区域,建立适合本地区PAH基因突变筛查方案,为本地区PKU的诊断、产前诊断及遗传咨询提供基础数据。
　　方法：根据国内前期研究结果采用分步测序的方案,首先对30例PKU患者PAH基因6个热点突变外显子3,5,6,7,11,12进行测序,再对未明确的突变患者进行外显子1,2,4,8,9,10,13测序。通过与PAH基因参考序列比较确定全部患者点突变基因型。对于通过测序方法未能明确突变基因型的患者采用MLPA方法进行外显子缺失突变检测,以发现患者是否存在PAH基因序列上的大片段缺失突变。
　　结果：通过对30例患者进行全部外显子序列进行突变分析,在60个等位基因中明确了58个突变基因,检出率为96.7％。这58个突变等位分属于23种突变,包括错义突变9种、无义突变2种、剪接突变9种、微小缺失突变2种、大片段缺失突变1种。其中R243Q突变频率最高(18.3%),其次是IVS4-1G>A(11.7%)和R111X(11.7%)。本研究在外显子8、11分别发现的Q304K和N393del两种突变为国际首次报道。通过MLPA技术在3例患者中检测到了大片段缺失突变-1436_-2del,其中1例为纯合缺失,2例为杂合缺失突变,突变频率为6.7%(4/60)。
　　结论：宁夏地区PKU患者PAH基因突变具有明显的热点突变(R243Q、IVS4-1G>A、R111X)和突变热点区域(外显子3、5、6、7、11、12)。宁夏地区PKU患者存在PAH基因的大片段缺失突变-1436_-2del,MLPA技术是检测PAH基因大片段缺失的有效手段。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

前言

1. 研究对象

2. 主要试剂

3. 主要仪器

4. 实验方法

4.1基因组DNA提取方法

4.2. 苯丙氨酸羟化酶基因全长外显子扩增引物设计、合成

4.3. 外显子PCR扩增

4.4. PCR反应产物电泳检测

4.5.测序

4.6. MLPA分析

4.7. 实验设计及技术路线

结果

1． PAH基因外显子1-13扩增及测序结果

2． 宁夏地区PKU患者PAH基因测序分析结果

3. 宁夏地区PAH基因突变类型及分布频率

4. MLPA检测结果分析

讨论

结论

参考文献

苯丙酮尿症分子遗传学研究进展

致谢

攻读学位期间发表的学术论文

个 人 简 历