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金丝小枣环磷酸腺苷制备技术研究

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符号和缩略词说明

摘要

1 前言

1.1 大枣

1.1.1 大枣介绍

1.1.2 大枣的营养及药用价值

1.1.3 大枣开发利用现状

1.1.4 金丝小枣的研究

1.2 环磷酸腺苷

1.2.1 环磷酸腺苷概述

1.2.2 环磷酸腺苷生物学功能

1.3 环磷酸腺苷的检测、提取与分离纯化

1.3.1 环磷酸腺苷的检测

1.3.2 环磷酸腺苷的提取

1.3.3 环磷酸腺苷的分离纯化

1.4 研究目的、内容和意义

1.4.1 研究的目的意义

1.4.2 研究的内容

2 材料与方法

2.1 主要试剂及仪器设备

2.1.1 材料

2.1.2 主要试剂

2.1.3 主要仪器

2.2 实验方法

2.2.1 金丝小枣中环磷酸腺苷的提取实验

2.2.2 树脂对金丝小枣环磷酸腺苷的分离纯化

2.2.3 硅胶柱层析纯化金丝小枣环磷酸腺苷工艺研究

2.2.4 实验设计

2.3 分析方法

2.3.1 高效液相色谱法检测环磷酸腺苷

2.3.2 树脂的筛选

2.3.3 D201树脂纯化环磷酸腺苷泄露点、洗脱体积、纯度的测定

2.3.4 硅胶层析柱纯化环磷酸腺苷泄露点、洗脱体积、纯度的测定

2.4 数据分析处理

3 结果与分析

3.1 环磷酸腺苷的检测

3.1.1 检测波长的确定

3.1.2 金丝小枣环磷酸腺苷总含量测定

3.2 超声波辅助提取金丝小枣环磷酸腺苷优化工艺

3.2.1 单因素实验

3.2.2 正交试验

3.3 微波-超声辅助提取金丝小枣环磷酸腺苷实验

3.3.1 单因素实验

3.3.2 PB实验设计与结果分析

3.3.3 响应面分析

3.3.4 验证试验

3.3.5 微波-超声波辅助提取与超声辅助提取、水提法的比较

3.4 金丝小枣环磷酸腺苷树脂纯化工艺优化

3.4.1 树脂的选择

3.4.2 D201树脂对金丝小枣环磷酸腺苷的动态吸附解析

3.4.3 环磷酸腺苷粗品纯度检测

3.4.4 树脂重复使用次数

3.5 金丝小枣环磷酸腺苷硅胶柱层析纯化工艺优化

3.5.1 泄露曲线的研究

3.5.2 上样液浓度对吸附率的影响

3.5.3 上样液流速对吸附率的影响

3.5.4 上样液pH值对吸附率的影响

3.5.5 洗脱流速对解析率的影响

3.5.6 洗脱曲线的研究

3.5.7 环磷酸腺苷制备品纯度检测

4 讨论

4.1 关于金丝小枣环磷酸腺苷的提取方法

4.2 关于离子交换树脂法对金丝小枣环磷酸腺苷的纯化

4.3 关于硅胶柱层析法对金丝小枣环磷酸腺苷的纯化

5 结论

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文情况

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摘要

环磷酸腺苷是一种环状核苷酸,是传递生命信息的“第二信使”。枣中环磷酸腺苷在所有已知动植物材料中含量最高。金丝小枣是我国枣中的珍品,富含多种营养物质及生物活性物质,其中环磷酸腺苷含量较高,颇具开发利用价值。以金丝小枣为原料制备环磷酸腺苷,为枣资源利用开辟了新的领域。本研究立足国内外金丝小枣环磷酸腺苷开发利用现状,以制备纯度在30%和95%以上环磷酸腺苷为目标,应用提取、纯化新技术、现代分析检测技术等,研究了金丝小枣环磷酸腺苷提取、分离纯化技术。主要获得的研究结果如下:
  1.本研究采用超声波辅助提取法,对金丝小枣环磷酸腺苷进行提取。在单因素实验结果的基础上,采用正交实验对提取条件进行优化,确定超声辅助提取金丝小枣环磷酸腺苷的最佳工艺条件为:常温,超声时间12min、料液比1∶12、超声功率240W,此条件下金丝小枣环磷酸腺苷提取率为76.46%。
  2.将微波-超声波辅助提取法应用到金丝小枣环磷酸腺苷的提取,通过单因素实验、PB实验、BB实验,确定最佳工艺条件为:微波功率440W、微波时间64s、料液比1∶8、超声时间21min、超声功率300W、超声温度20℃,在此条件下,金丝小枣环磷酸腺苷提取率为90.83%。与超声辅助提取法、水提法相比,微波-超声波辅助提取环磷酸腺苷提取率分别提高了14.37%及28.66%。
  3.从饱和吸附解析实验和D201树脂对金丝小枣环磷酸腺苷具有良好的静态吸附解析动力学特性两方面考虑,确定利用D201离子交换树脂纯化金丝小枣环磷酸腺苷。通过研究动态吸附解析实验和不同因素对离子交换树脂纯化金丝小枣环磷酸腺苷的影响,确定离子交换树脂法的最佳工艺条件为:样液pH值不变、上样液浓度30mg/L、上样液速度2mL/min上样,在甲酸浓度0.5mol/L、甲酸洗脱流速3mL/min的条件下洗脱,干燥,得到纯度在34%以上的环磷酸腺苷粗品。
  4.通过研究不同因素对硅胶柱层析法纯化金丝小枣环磷酸腺苷的影响,确定了硅胶柱层析法纯化金丝小枣环磷酸腺苷的最佳工艺条件为:上样液浓度为0.4mg/mL、上样液的流速为2mL/min、样品pH为4.5,用乙酸乙酯∶苯∶甲醇=1∶1∶3作为洗脱剂,洗脱流速为3mL/min的条件下洗脱,干燥,得到纯度在95%以上的环磷酸腺苷制备品。

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