山东省貂源大肠杆菌分离鉴定及相关生物学特性研究

摘要

大肠杆菌病的发生和流行严重威胁水貂养殖业的健康发展。目前大肠杆菌病在水貂养殖业中普遍存在，为了防治水貂大肠杆菌病，抗菌药物被长期、广泛的不合理使用，导致了大肠杆菌耐药菌株不断出现，给该类疾病的防控带来诸多困难。另外，动物源耐药菌所携带的耐药基因可以转移至其他物种的病原菌，对人和其他物种的健康也构成潜在威胁。为了初步探究山东省貂源大肠杆菌的流行血清型、耐药情况、致病性等，本论文开展了以下相关研究，对山东省荣成、文登、诸城等地2010~2014年病死貂病料进行细菌分离纯化和生化试验鉴定；对分离到的大肠杆菌进行O抗原血清型鉴定；根据药敏试验结果对大肠杆菌的耐药基因进行了检测，此外，还对分离得到的大肠杆菌进行了水貂回归试验，进一步了解大肠杆菌的致病特性。
　　试验结果如下：分离得到的27株大肠杆菌中，血清型包括O88（7株）、O114（3株）、O78（2株）、O167（2株）、O18（3株）、O20（2株）、O15（4株），O10、O35、O91、O92各1株，其中以大肠杆菌O88为主要流行的血清型，占本次检出全部血清型的25.9％。通过药敏试验发现致病菌对头孢类、喹诺酮类、甚至多粘菌素等多种药物产生耐药性。经过耐药基因检测，发现分离菌不同程度携带耐药基因，其中TEM检出5株（18.5%），CFR检出1株（3.7%），qnrA检出5株（18.5%），oqxA检出11株（40.7%），tetA检出12株（44.4%），gyrA检出10株（37%）。在27株定型菌种中，携带1种耐药基因的检出6株（22.2%），携带3种耐药基因的检出4株（14.8%），携带4种耐药基因的检出4株（14.8%），携带5种耐药基因的检出5株（18.5%）。另外，对分离得到的27株致病性大肠杆菌分别进行了回归试验，27组实验组水貂在接种分离菌后3~5d内，均出现腹泻、剧烈下痢等症状。取病死水貂脑组织接种于麦康凯琼脂培养基37℃培养12h，有红色菌落生长，革兰氏染色后镜检符合大肠杆菌特征，生化试验鉴定显示分离菌为大肠杆菌，而对照组5只水貂全部存活，说明这27株分离菌均为致病性大肠杆菌。
　　以上结果说明，我省貂源致病性大肠杆菌血清型较为复杂多样，耐药性严重且存在交叉耐药现象，并具有较强的致病性。本研究为山东省水貂大肠杆菌病的防治和合理用药提供了理论依据。

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1引言

1.1大肠杆菌生物学特性

1.2大肠杆菌致病机理

1.3大肠杆菌检测方法

1.4大肠杆菌耐药性

2材料与方法

2.1材料

2.2方法

3结果与分析

3.1分离菌纯化结果

3.2分离菌生化鉴定结果

3.3大肠杆菌O抗鉴定

3.4大肠杆菌药敏试验结果

3.5大肠杆菌耐药基因扩增及序列比对结果

3.6大肠杆菌水貂回归试验结果

3.7水貂病理切片结果

4讨论

4.1大肠杆菌血清型与致病性的关系

4.2大肠杆菌耐药性与耐药基因

4.3水貂大肠杆菌病防治

5 结论

参考文献

附录

致谢

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