声明
符 号 说 明
1 前言
1.1真菌毒素及其危害
1.1.1黄曲霉毒素及其危害
1.1.2玉米赤霉烯酮及其危害
1.1.3赭曲霉毒素及其危害
1.1.4脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其危害
1.1.5展青霉素及其危害
1.2真菌毒素检测技术的研究进展
1.2.1仪器分析法
1.2.2免疫分析法
1.3噬菌体展示技术的研究进展
1.3.1噬菌体展示体系分类
1.3.2噬菌体展示技术在制备基因工程抗体上的应用
1.3.3噬菌体展示技术在制备小分子分析物抗原替代物上的应用
1.3.4噬菌体展示技术在小分子分析物非竞争免疫分析法中的应用
1.4本课题的目的和意义
2 材料与方法
2.1材料
2.1.1实验动物
2.1.2载体与菌株
2.1.3噬菌体展示肽库及宿主菌
2.1.4主要生化试剂
2.1.5主要仪器设备
2.1.6实验引物
2.1.7培养基和试剂的配制
2.2实验方法
2.2.1 ZEN人工抗原的化学合成和鉴定
2.2.2 BALB/C小鼠的免疫及检测
2.2.3 ZEN单克隆抗体的制备
2.2.4 ZEN DC-MB-ELISA检测方法的建立
2.2.5 ZEN DC-ELISA检测方法的建立
2.2.6黄曲霉毒素纳米抗体Nb28的表达及免疫磁珠的制备
2.2.7 Nb28抗原模拟表位的筛选及酶标抗原模拟表位的制备
2.2.8基于噬菌体抗原模拟表位的IC-phage-MB-ELISA检测方法的建立
2.2.9基于抗原模拟表位-HRP的AFB1 MB-ELISA检测方法的建立
3 结果与分析
3.1 ZEN单克隆抗体的制备
3.1.1 ZEN人工抗原的合成和鉴定
3.1.2 BALB/C小鼠的免疫及检测
3.1.3杂交瘤细胞的筛选及单克隆抗体的制备和鉴定
3.2 ZEN免疫检测方法的建立
3.2.1 ZENDC-MB-ELISA检测方法的建立
3.2.2 ZENDC-ELISA检测方法的建立
3.3黄曲霉毒素纳米Nb28免疫磁珠的制备及噬菌体模拟表位的筛选
3.3.1黄曲霉毒素纳米抗体Nb28表达菌株的制备
3.3.2 Nb28-BAD融合蛋白的表达、生物素化、纯化及免疫磁珠的制备
3.3.3 Nb28抗原模拟表位的筛选
3.4 AFB1免疫检测方法的建立
3.4.1基于噬菌体抗原模拟表位的AFB1 IC-phage-MB-ELISA检测方法的建立
3.4.2基于抗原模拟表位-HRP的AFB1 DC-MB-ELISA检测方法的建立
4 讨论
4.1 MB-ELISA检测方法的建立
4.2基于纳米抗体和抗原模拟表位的免疫检测方法的建立
5 结论
参 考 文 献
致 谢
攻读学位期间发表的论文及成果
