人β-糖蛋白I在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的表达与鉴定

摘要

目的:探讨β<,2>-糖蛋白I(β<,2>-glycoprotein I，β<,2>-GPI)基因在Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中的表达。 方法:提取人正常肝脏组织的Total RNA，根据GeneBank(NM- 000042)报道的β<,2>-GPI的基因序列，通过RT-PCR扩增β<,2>-GPI基因，将其克隆到供体质粒pFastBacHTA中，通过。DHl0Bac菌筛选、鉴定并抽提获得高纯度的重组穿梭载体 Bac-β<,2>-GPI，并脂质体介导将重组穿梭载体转染SD细胞，获取并扩增重组病毒。提取转染的昆虫细胞的Total RNA，通过RT-PCR鉴定β<,2>-GPI基因在RNA水平的表达。 结果:1．构建了携带β<,2>-GPI基因的重组供体质粒pFastBac-β<,2>-GPI，经双酶切鉴定和序列分析证实β<,2>-GPI基因已正确插人供体质粒的多克隆位点。2．构建了携带β<,2>-GPI基因的重组穿梭载体。Bac-β<,2>-GPI，经PCR鉴定分析证实β<,2>-GPI基因已正确转座插人穿梭载体的转座接触位点。3．成功转染Sf9细胞，鉴定了β<,2>-GPI基因的RNA水平的表达。 结论:成功构建了β<,2>-GPI的昆虫-杆状病毒表达载体，并证实了β<,2>-GPI基因在RNA水平的成功表达。

目录

论文说明:英文缩略语表

声明

前言

材料与方法

实验结果

讨论

小结

基本路线

附图

参考文献

文献综述β2-GPI在抗磷脂综合症中的作用

攻读学位期间发表文章及科研情况

个人简历

致谢