乙型肝炎病毒X抗原表达与肝细胞凋亡的相关性研究

摘要

[背景/目的]：
　　 全球每年约100万人死于乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)慢性感染导致的肝硬化(livercirrhosis，LC)和肝癌(Hepatocellularcarcinoma,HCC)。HBV有4个开放性读码框架即S、C、P和X，其最小的X读码框架编码的X蛋白(HBx)即X抗原(HBxAg)是一种多功能的蛋白。HBxAg具有反式作用，其通过与宿主因素相互作用影响病毒的转录与复制、信号转导及细胞凋亡等。研究证实，HBxAg在细胞凋亡方面具有双向调控作用。诱导细胞凋亡的一条重要途径是死亡受体介导的途径，典型的死亡受体途径即Fas/Fas-L死亡受体途径。有关HCC患者HBxAg与Fas及Fas-L的关系已有报道。但在HBV慢性感染、LC及HCC患者中，HBxAg与Fas、Fas-L的关系的对比研究尚未见报道。为了进一步探讨HBxAg在疾病进展及肝癌发生中的作用，我们对HBV相关性肝病患者肝组织中HBxAg与典型死亡受体途径细胞凋亡蛋白进行了对比研究和探讨。
　　 [方法]：
　　 收集济南市传染病医院和山东省省立医院78例HBV相关肝病患者肝脏穿刺或手术切除标本及临床资料，其中包括HBV慢性感染者38例、乙肝肝硬化(livercirrhosis，LC)患者20例、HCC患者20例。38例HBV慢性感染者中包括14例临床上诊断的携带者及24例慢性乙型肝炎患者，由于这14例携带者病理学报告显示均存在轻度的炎症分级及纤维化分期，与轻度慢性肝炎难以鉴别，故本文中统称为HBV慢性感染者。肝脏炎症分级及纤维化分期按照Knodell标准。免疫组织化学染色方法检测3组患者肝组织中HBxAg及凋亡相关蛋白Fas、Fas-L的表达。实验结果应用SPSS17.0软件进行分析。计数资料应用x2检验及Fisher精确概率法，多个样本间的两两比较应用x2分割法，等级资料应用秩和检验，相关性分析采用Spearman等级相关。
　　 [结果]：
　　 1.HBxAg主要分布于肝细胞的胞浆及胞核内，肝细胞外组织未见明显着色。3组患者肝组织中HBxAg表达的阳性率分别为71.1％、60.0％和65.0％，3组间阳性率(x2=0.754，P=0.686)及表达强度(x2=3.070，P=0.215)的差异均无统计学意义。
　　 2.Fas在汇管区、肝细胞及癌旁组织中的淋巴和单核细胞中均有表达。Fas在3组患者肝细胞中的阳性率分别为28.9％、20.0％和5.0％，阳性率(x2=4.667，P=0.101)及表达强度(x2=4.000，P=0.135)的差别均无统计学意义。3组患者肝内淋巴细胞中Fas表达的阳性率分别为68.4％、60.0％和90.0％，差别无统计学意义(x2=4.861，P=0.088)。但表达强度的差别有统计学意义(x2=17.442，P=0.00016)，其中，HCC患者的表达强度显著高于HBV慢性感染(Z=-4.360，P=0.00001)。
　　 3.Fas-L在3组患者肝内淋巴细胞中均未见明显的表达，3组患者肝细胞中Fas-L的阳性率分别为36.8％、45.0％和60.0％，组间Fas-L的阳性率(x2=2.988，P=0.225)及表达强度(x2=4.343，P=0.114)差异无统计学意义。
　　 4.在LC的重症炎症区域及部分HCC患者中可见HBxAg与Fas-L在同一区域大量表达。
　　 5.在HBV慢性感染及LC患者中，HBxAg与Fas(r=0.304，P=0.02)及与Fas-L（r=0.368，P=0.004）的表达强度具有相关性。Fas与Fas-L的表达也存在相关性(r=0.448，P=0.0004)。HBxAg与炎症分级(r=0.109，P=0.415)或纤维化分期(r=-0.015，P=0.908)均无明显的相关性。
　　 6.38例HBV慢性感染、20例LC和10例HBV相关性HCC患者（另10例缺少血清HBVDNA定量检查结果）血清HBVDNA定量值取对数，并分为3组:＜3log，3～6log及≥6log。结果显示HBxAg的表达量随着病毒载量的升高而升高，三组间的差别具有统计学意义(x2=17.106，P=0.0002)。≥6log组HBxAg阳性率与＜3log组比较有统计学意义(x2=16.800，P＜0.05)，与3～6log组比较无统计学意义(x2=3.112，P＞0.05)。3～6log组与＜3log组比较有统计学意义(x2=6.930，P＜0.05)。
　　 7.HBxAg与性别、年龄及e抗原状态均无相关性（x2值分别为1.973、0.707和2.649，P均＞0.05）。而在转氨酶水平＞40U/L组中，HBxAg表达的阳性率高于转氨酶水平≤40U/L组(x2=7.736，P＜0.01)。
　　 [结论]：
　　 1.HBxAg在HBV感染各期均起重要作用，早期主要上调肝细胞Fas表达诱导肝细胞凋亡，使肝脏炎症坏死加重;后期主要上调肝细胞Fas-L表达诱导免疫逃避。
　　 2.HBxAg和高病毒载量在慢性HBV感染患者病情发展和癌变中起重要作用。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

(一)、乙型肝炎病毒X基因及其编码的X蛋白HBx

(二)、乙肝病毒X蛋白HBx的功能及其致癌作用

(三)、HBx蛋白与细胞凋亡

材料和方法

(一)研究对象

(二)主要试剂

(三)实验主要仪器

(四)实验主要材料

(五)实验方法步骤

(六)、免疫组化结果判断

(七)、肝脏病理学报告结果均按照knodell标准

(八)、HBVDNA量的测定

(九)、统计分析

结果

讨论

结论

附录与附图

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间撰写及发表的论文