子宫内膜癌抑癌基因甲基化及UHRF1复合体表观遗传调控的研究

摘要

研究目的:为子宫内膜癌(Endometrial carcinoma，EC)的诊断寻找新的甲基化标志物，并进一步探索EC关键抑癌基因的表观遗传调控机制。
　　研究方法:(1)运用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR，MSP)法检测155例子宫内膜标本（正常内膜27例，单纯性增生22例，复杂性增生29例，不典型增生18例和子宫内膜样腺癌59例）6个抑癌基因(tumor suppressor genes，TSGs)（CDH13，SHP1，HIN1，DKK3，CTNNA1和PCDH8）启动子区的甲基化状态。(2)单独或联合应用5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine，5-Aza-CdR)和曲古抑菌素A(trichostatinA，TSA)处理子宫内膜样腺癌Ishikawa和Kle细胞株，实验分为四组（未处理组，5-Aza-CdR组，TSA组和5-Aza-CdR+TSA组）。运用MSP和实时定量PCR(reverse transcription real-timequantitative PCR，qRT-PCR)等实验方法分别检测2个细胞株各组中CDH13和SHP1基因的甲基化状态以及RNA表达水平的变化。(3)运用免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation，Co-IP)技术检测两个细胞株的各组中UHRF1蛋白是否能够共沉淀PRMT5蛋白以及两者之间的关系。
　　结果:(1)在EC中，CDH13和SHP1启动子区存在着较高的甲基化率（分别为81.36％和86.44％），而其他四个抑癌基因（HIN1，DKK3，CTNNA1和PCDH8）的甲基化率则较低（分别为8.47％，15.25％，20.34％和16.95％）。CDH13不仅在EC中的甲基化率较高，在复杂增生和不典型增生中同样出现了较高的甲基化率（分别为51.72％和50.00％），且其甲基化率与患者年龄、肿瘤分化程度以及肿瘤浸润深度存在相关性(p＜0.05)。SHP1仅在EC中存在较高的甲基化率，且与患者年龄和肿瘤分化程度相关(p＜0.05)。(2)在Ishikawa和Kle细胞株中:未处理组CDH13和SHP1启动子区处于完全甲基化状态;5-Aza-CdR或TSA单独处理后CDH13和SHP1启动子区甲基化状态被部分逆转，同时RNA的表达量增加(p＜0.01);5-Aza-CdR和TSA联合处理组CDH13和SHP1启动子区甲基化状态被完全逆转，且RNA水平显著升高(p＜0.01)。(3)未处理组、5-Aza-CdR或TSA单独或联合处理组，UHRF1蛋白均能共沉淀PRMT5蛋白，与未处理组相比两者的表达量明显下调(p＜0.05)。
　　结论:在子宫内膜癌的两个细胞株中，CDH13和SHP1基因启动子区呈高甲基化状态。CDH13的甲基化在EC的早期阶段（包括复杂性增生和不典型增生）既已发生。UHRF1可以通过与PRMT5形成复合体来调控抑癌基因启动子区甲基化的发生。

目录

声明

摘要

中英文缩写词对照表

前言

1 表观遗传学概述

2 表观遗传学改变治疗药物

材料与方法

1 临床资料

2 实验方法及步骤

结果

讨论

结论

附图表

参考文献

致谢

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