EBV相关胃癌细胞凋亡与c-myc和Ki-67异常表达的检测和分析

摘要

目的: 检测EBV相关胃癌(EBV associated gastric carcinomas，EBVaGC)、与之匹配的EBV阴性胃癌(EBVnegative gastriccarcinomas，EBVnGC)以及相应癌旁组织中细胞凋亡和c-myc及Ki-67蛋白的表达，同时检测EBV编码基因的表达，探讨它们在EBVaGCs发生发展中的作用。 方法: 选取13例EBVaGCs、45例与之相匹配的EBVnGCs和58例相应癌旁组织作为研究对象，采用脱氧核苷酸移换酶(TdT)介导的dUTP切口末端标记方法(TUNEL)检测细胞凋亡指数(A1)，免疫组化技术检测c-myc及Ki-67蛋白的表达；RT-PCR和Southern杂交技术检测EBV相关基因(核抗原EBNA1和EBNA2编码基因，潜伏膜蛋白LMP1编码基因，早期基因BARFl和BHRFl)的表达。 结果: ①13例EBVaGCs EBNA1 mRNA均为阳性，而EBNA2和LMP1mRNA均为阴性；早期基因中有6例BARF1表达阳性，2例BHRF1表达阳性。 ②EBVaGC和EBVnGC组织中Ki-67指数(KI)平均值分别为28.254±6.284和37.864±14.523，统计学分析表明：两组间KI平均值差别有显著性(t=3.458，P<0.01)。 ③58例胃癌(GC)、16例伴癌前病变癌旁粘膜(MAWPL)、42例不伴癌前病变癌旁粘膜(MAWOPL)组织中Ki-67指数分别为35.716±15.091、31.817±10.332和12.441+10.912，统计学分析结果显示胃癌和MAWPL组织中Ki-67指数明显高于MAWOPL组织，差异有显著性(P<0.01)。 ④58例胃癌及癌旁组织中c-myc蛋白的阳性率分别为55.93％(33/58)和36.21％(21/58)，两组比较有显著性差异(x2=5.042，P<0.05)：EBVaGC组和EBVnGC组c-myc阳性率分别为61.54％(8/13)和55.56％(25/45)，两组之间无明显差异(x2=0.147，P>0.05)；58例胃癌组织中c-myc阳性组KI平均值明显高于c-myc阴性组(t=3.364，P<0.01)。 ⑤EBVa6C、EBVnGC及EBVaGC癌旁组织中AI分别为0.969±0.413、2.033±0.600和3.254±0.459，统计学分析表明：EBVaGC与EBVnGC细胞凋亡的差别有显著性(t=5.979，P<0.01)，EBVaGC组织和相应癌旁组织的差别亦有显著性(t=13.343，P<0.01)；c-myc阳性组的AI明显低于c-myc阴性组，差异有显著性(t=5.206，P<0.01)。 结论: ①EBVaGC组织c-myc的表达与EBV感染无明显的相关性，而EBV感染可影响EBVaGC组织中Ki-67的表达。②EBVaGC组织中细胞凋亡指数低于EBVnGC，提示EBV感染可以抑制细胞凋亡，但细胞凋亡发生的机制与Ki-67和c-myc蛋白的表达无明显相关性。③EBVaGC组织中LMP1和EBNA2表达阴性，与c-myc表达和细胞增殖、细胞凋亡的发生无相关性；早期基因BARF1和BHRF1基因可能通过诱导c-myc蛋白表达抑制细胞凋亡等作用促进EBVaGC的发生发展。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

第一章材料与方法

1.1仪器与试剂

1.2研究对象

1.3 EBV编码基因的RT-PCR检测

1.4免疫组化检测c-myc和Ki-67的表达

1.5 脱氧核苷酸移换酶（TdT）介导dUTP切口末端标记方法（TUNEL）检测细胞凋亡

1.6实验结果的统计学分析

第二章结果

2.1 EBV相关胃癌组织中病毒编码基因的表达

2.2细胞凋亡检测结果

2.3 c-myc免疫组化检测结果

2.4 Ki-67免疫组化检测结果

第三章讨论

3.1 EBVaGC组织中细胞凋亡及c-myc的表达

3.2 EBVaGC组织中病毒编码基因和Ki-67的表达

3.3 EBVaGC组织中EBV编码基因与细胞凋亡、c-myc及Ki-67蛋白表达的关系

第四章小结

参考文献

综述 EBVLMP1及其与恶性肿瘤关系的研究

致谢