肺原发性腺癌胸水细胞蜡块检测BRAFV600E基因突变的研究

摘要

目的：分析BRAFV600E基因突变在非小细胞肺癌患者阳性胸水中的表达情况。
　　方法：本研究纳入24例经影像学及病理检查证实为非小细胞肺癌并在胸水内查见肺腺癌细胞的患者，将其阳性胸水离心沉渣制作细胞块，采用石蜡包埋组织DNA分离试剂盒（离心柱型）法（AmoyDx FFPE DNA Kit（Spin Column））分离细胞块样品DNA，使用ARMS（amplification refractory mutation system，ARMS）方法进行PCR扩增，检测BRAFV600E基因突变情况。另外采用Maxvisiontm免疫组织化学染色方法检测24例肺腺癌阳性胸水BRAF蛋白表达情况。
　　结果：24例BRAFV600E基因突变检测成功率为100％，检出突变2例（男女性各1例），突变检出率为8%。24例BRAF蛋白检测有16例为阳性表达，8例为阴性表达，阳性率为67%。BRAFV600E基因突变阳性女性患者BRAF蛋白表达为阴性，突变阳性男性患者BRAF蛋白表达结果为阳性。其余22例BRAFV600E基因突变阴性的病例中有7例为BRAF蛋白阴性表达，15例阳性表达，行免疫组化法检测BRAF蛋白阴性表达病例数与行ARMS方法检测出的未发生BRAFV600E突变病例数符合率仅为32%。
　　结论：应用非小细胞肺癌患者阳性胸水检测BRAFV600E基因突变具有一定可行性，有可能代替肺癌肿瘤组织检测而指导晚期非小细胞肺癌患者的靶向药物治疗，并为通过阳性胸水检测其他基因提供了可能性。另外本研究表明BRAF蛋白表达情况不能替代BRAFV600E基因突变的检测结果。

目录

封面

中文摘要

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缩略词表

目录

前言

实验材料和方法

一、研究对象

二、实验方法

实验结果

一、 BRAFV600E基因检测结果

二、BRAF蛋白的免疫组织化学检测结果

三、BRAFV600E基因突变与BRAF蛋白表达的相关性分析

四、BRAFV600E基因突变患者临床资料分析

讨论

一、癌性胸水细胞学蜡块切片结合免疫组化检测确定肺癌组织类型的价值

二、使用阳性胸水细胞蜡块检测BRAF基因的可行性

三、制作胸水沉渣细胞蜡块注意事项及使用沉渣细胞蜡块检测BRAFV600E基因时需要注意的事项

四、BRAFV600E突变的意义

五、BRAFV600E突变肺癌病人的临床病理特征

六、使用非小细胞肺癌阳性胸水离心组织块检测BRAFV600E突变的临床意义

七、BRAF蛋白的免疫组化检测的临床意义

结论

参考文献

综述非小细胞肺癌中BRAF基因突变及其临床意义

攻读学位期间的研究成果

致谢

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