miR-483-3P下调RIOK3蛋白表达并促进神经母细胞瘤的增殖侵袭和迁移

摘要

目的：通过实验研究microRNA-483-3P(miR-483-3P)对神经母细胞瘤细胞的生物学行为的影响，诸如增殖能力、侵袭能力及迁移能力。利用生物信息学软件预测miR-483-3P的靶基因并加以验证，以及探索miR-483-3P对所预测的靶基因的影响。
　　方法：miRNA微阵列芯片（MicroArray）的结果发现,与原发瘤相比，miR-483-3P在神经母细胞转移瘤中表达水平明显上调，差异倍数显著，并居于所检测出的差异表达的miRNA的第一位。利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将化学合成的miR-483-3P inhibitor、miR-483-3P inhibitor的阴性对照序列（negative control）分别转染入人神经母细胞瘤SH-SY-5Y细胞株中，实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）技术检测各组神经母细胞瘤经处理后miR-483-3P的表达水平，细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测各组神经母细胞瘤细胞的增殖情况，Transwell小室实验检测各组神经母细胞瘤细胞的体外侵袭以及迁移能力。利用多个靶基因预测数据库，综合预测miR-483-3P的靶基因，荧光素酶报告基因检测实验、Western blot实验加以验证。
　　结果：实验所取的9对神经母细胞瘤组织与癌旁正常组织，RT-QPCR结果显示，miR-483-3P在神经母细胞瘤肿瘤组织中表达水平明显高于癌旁正常组织（P＜0.01）;与转染了miR-483-3P inhibitor的阴性对照组相比，癌细胞转染miR-483-3P inhibitor后，miR-483-3P被抑制表达水平显著下调（P＜0.01），细胞的增殖情况和体外迁移能力均降低（P＜0.05）。经多个靶基因生物信息学软件分析，预测出RIOK3是miR-483-3P的靶基因之一，当神经母细胞瘤细胞转染了miR-483-3P inhibitor后荧光酶的活性明显升高(P＜0.01)。与miR-483-3P inhibitor阴性对照组相比，当细胞转染了miR-483-3P inhibitor后，RIOK3蛋白的表达水平明显升高（P＜0.01）。
　　结论：RIOK3是miR-483-3P的靶基因之一，miR-483-3P能下调RIOK3蛋白的表达，miR-483-3P可显著促进神经母细胞瘤细胞的增殖及体外迁移能力。

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引言

第1章材料和方法

1.1材料

1.1.1细胞及组织来源

1.1.2主要仪器

1.1.3主要试剂

1.1.4主要溶液的配制方法

1.2方法

1.2.1提取神经母细胞瘤标本组织中总的RNA

1.2.2神经母细胞瘤细胞系的培养

1.2.3神经母细胞瘤miR-483-3P相关基因的转染

1.2.4培养的神经母细胞瘤细胞中总RNA的提取

1.2.5miR-483-3P的实时荧光定量聚合酶链式反应

1.2.6细胞增殖实验

1.2.7肿瘤细胞迁移实验

1.2.8神经母细胞瘤miR-483-3P靶基因的预测

1.2.9荧光素酶报告基因检测实验验证miR-483-3P的靶基因

1.2.10 Western blot检测miR-483-3P对细胞RIOK3表达的影响

1.3统计学处理

第2章结果

2.1miR-483-3P在神经母细胞瘤组织和癌旁组织中的表达有差异

2.2基因转染后miR-483-3P表达的变化

2.3miR-483-3P影响神经母细胞瘤细胞的增殖能力

2.4miR-483-3P影响神经母细胞瘤细胞的迁移能力

2.5miR-483-3P 靶基因的预测

2.6miR-483-3P靶向调控RIOK3的表达

2.7miR-483-3P对蛋白表达的影响

第3章讨论

结论

参考文献

综述：miRNAs对神经母细胞瘤生物学行为影响的研究进展

攻读学位期间发表文章情况

致谢

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