他克莫司对阿霉素肾病大鼠肾脏的保护作用及机制研究

摘要

目的：探讨他克莫司（Tacrolimus，FK506）对阿霉素肾病大鼠肾脏的保护作用以及对Notch信号通路的影响及其机制；比较他克莫司和雷公藤甲素（triptolide，TP）两种药物对肾脏保护作用的效果差别。 方法：将60只Wistar雄性大鼠随机分为4组：对照组(N组，15只)；模型组(ADR组，15只)；雷公藤甲素治疗组（TP组，15只）；他克莫司治疗组（FK506组，15只）。用一次鼠尾静脉注射阿霉素（adriamycin，ADR）建立阿霉素肾病模型。ADR组、TP组、FK506组分别固定大鼠，一次尾静脉注射阿霉素6.5mg/kg，N组注射等剂量的生理盐水，1周后将大鼠分别放入代谢笼内留取24h尿液以检测24小时尿蛋白，与N组相比，ADR组、TP组、FK506组尿蛋白升高有统计学意义视为造模成功。造模成功后，TP组和FK506组分别给予200ug/kg/d雷公藤甲素、0.5mg/kg/d他克莫司灌胃8周，并分别于第4、6、8周检测24h尿蛋白定量，并于第8周末处死大鼠。测定各组大鼠的生化指标如肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、胆固醇（TC），通过光镜、电镜观察肾组织学改变，利用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测Fkbp12，Notch1，Hes1mRNA，并通过蛋白质印记实验（western blot），分别测定Fkbp12，Notch1与Hes1的蛋白表达。 结果：（1）对于ADR组，各个时间节点24h尿蛋白定量、肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、胆固醇（TC）均高于N组，差异有统计学意义(P<0.05)；TP组、FK506组24h尿蛋白定量、肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、胆固醇（TC）均低于ADR组，差异有统计学意义（P<0.05）。FK506组24h尿蛋白定量、胆固醇（TC）均低于TP组，差异有统计学意义（P<0.05）。（2）ADR组肾小球增大，系膜区增宽，且系膜细胞增生，足突排列紊乱、融合，基底膜增厚；TP组、FK506组病理改变较其减轻。（3）ADR组Notch1、Hes1mRNA和蛋白的表达均高于N组，差异有统计学意义（P<0.05）；TP组、FK506组Notch1、Hes1mRNA和蛋白的表达均低于ADR组，差异有统计学意义（P<0.05）；FK506组Notch1、Hes1mRNA和蛋白的表达均低于TP组，差异有统计学意义（P<0.05）。FK506组Fkbp12表达有所降低，但并未见统计学差异（P>0.05）。 结论：（1）阿霉素肾病大鼠模型Notch信号通路的相关指标Notch1、Hes1的表达增加，表明Notch信号通路的过度表达可能与肾损伤有关；（2）应用雷公藤甲素、他克莫司干预后发现，Notch1、Hes1的表达相对下降，表明雷公藤甲素与他克莫司均可通过抑制异常表达的Notch信号，发挥肾脏保护作用；（3）与TP组相比，应用他克莫司对Notch通路的抑制更加明显，且24h尿蛋白定量、胆固醇（TC）均低于TP组，表明他克莫司治疗阿霉素肾病的疗效优于雷公藤甲素。

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