siRNA介导的Gaveoin-1基因沉默对于FBJ-S1细胞的影响以及关于Gdla结合分子的研究

摘要

窖蛋白-1(Caveolin-1)是胞膜窖的一种基本结构成分，通常被认为是一种肿瘤抑制蛋白。胞膜窖与丝裂信号，肿瘤的生成以及转移都具有一定的联系。研究表明神经节苷脂GDla可抑制小鼠骨肉瘤细胞系FBJ细胞的转移，并可诱导Caveolin-l的表达，为研究Caveolin-1在GD1a调控细胞转移的信号通路中的作用，我们使用siRNA技术在Caveolin-1表达量较高但转移性较差的FBJ-S1细胞中特异性的抑制Caveolin-1的表达。RT-PCR以及免疫印迹实验结果表明，在稳定转染Caveolin-1 siRNA的单克隆细胞中，siRNA对于Caveolin-1基因表达以及蛋白质合成最大抑制效果可达80％。创伤治愈（划痕恢复）实验结果显示，Caveolin-1表达量的降低可提高细胞的移动能力。通过WST法测定细胞存活度发现，正常培养条件下，Caveolin-1表达量的下调并未影响细胞增殖。但在无血清条件下，与对照细胞，Caveolin-1 siRNA转染的细胞存活率较高。使用二维电泳结合免疫印迹法对于去污剂不溶性成分(DIF)进行分离并分析发现，Caveolin-1 siRNA转染的细胞的DIF中，丝氨酸蛋白磷酸化明显增强，说明可能有细胞信号被诱发。通过对转然后细胞内其他一些分子基因表达水平的检测，发现Caveolin-1表达量下降后，肝细胞生长因子的表达显著升高，肝细胞生长因子是一种多功能的细胞因子，可诱导细胞移动，弥散并可提高肿瘤的侵袭和转移能力。而在转染Caveolin-1 siRNA的细胞中导入Caveolin-1 cDNA恢复Caveolin-1的表达水平后，发现肝细胞生长因子的表达量受到明显抑制。
　　 这项研究结果显示Caveolin-1在调控FBJ-SI细胞行为上有很重要的作用，并且为GD1a通过Caveolin-1抑制肿瘤转移这一理论提供了进一步支持。