降血脂溶栓保健啤酒的初步研究

摘要

本实验先对含连有纤溶酶基因的分泌型表达载体 pPIC9K的大肠杆菌DH5α活化后，提取质粒，并将其转入酿酒酵母菌中，得到一株含有纤溶酶基因的酿酒酵母菌，并对外源基因的表达和稳定性做了分析。同时对重组酿酒酵母菌的发酵特性做了分析，主要比较了重组酿酒酵母菌与原始酿酒酵母菌在接种量、温度、pH上的选择和酿酒酵母菌的酒精耐受性、热死灭温度、凝聚性、发酵力的变化，分析转入了纤溶酶基因对酿酒酵母菌的发酵能力是否产生影响。最后用重组酿酒酵母菌做啤酒发酵试验，检测主发酵结束后发酵液中的纤溶酶含量，为生产具有降血脂溶栓功能的保健啤酒提供理论支持和依据。
　　研究结果表明，通过 PCR检测证实纤溶酶基因已在酿酒酵母菌基因组内整合，通过纤溶酶活性检测进一步证实纤溶酶基因可在酿酒酵母菌体内分泌和表达。在没有选择压力的情况下，纤溶酶基因的遗传稳定性很好，5代内都能稳定传代。
　　通过比较重组酿酒酵母菌与原始酿酒酵母菌在接种量、温度、pH上的选择，得到的结果：在接种量和pH值的选择上没有很大的差异，在接种量为1％，pH值为4.5时，能达到最好的效果；在发酵温度的选择上存在差异，分别在30℃和28℃能达到最好的效果。由此看出，转入了纤溶酶基因对酿酒酵母菌在接种量、温度、pH上的选择差异不大。
　　通过比较重组酿酒酵母菌与原始酿酒酵母菌的酒精耐受性、热死灭温度、凝聚性、发酵力，得到的结果：酒精耐受性实验中耐酒精能力均为12％；热死灭温度实验中两株菌的热死灭温度均为60℃；凝聚性试验中，本斯值分别为1.4和1.3，凝聚性适中；发酵力实验中两株菌的发酵速率、真正发酵度、外观发酵度基本相同。由此看出，两株菌的发酵性能基本一致，转入了纤溶酶基因对酿酒酵母菌的发酵性能影响不大。
　　啤酒主发酵完成后，发酵液经处理后在波长为595nm处测吸光值，带入标准蛋白曲线中得到啤酒发酵液中纤溶酶的含量为125.14U/ml。

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目录

1 前言

1.1 保健啤酒的概述

1.2 血栓的形成与溶解机制

1.3 溶栓剂的研究进展

1.4 酵母表达系统

1.5 纤溶酶的来源及研究进展

1.6 本研究的目的及意义

1.7 本研究的主要内容及目标

2 试验材料和方法

2.1 试验材料

2.2 方法

3 结果与分析

3.1 纤溶酶基因的获得

3.2 纤溶酶基因在酿酒酵母菌中的表达

3.3 重组菌遗传稳定性实验

3.4 酿酒酵母菌发酵特性测定的结果与分析

3.5 啤酒中纤溶酶含量的测定结果与分析

4 讨论和结论

4.1 讨论

4.2 结论

5 展望

致谢

参考文献

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