内蒙古包头和巴彦淖尔地区传统乳制品中乳酸菌的分离鉴定及优势菌群q-PCR定量分析

摘要

传统乳制品是乳酸菌的天然栖息环境，为揭示干旱半荒漠地区传统乳制品中乳酸菌菌群结构，并分离保藏乳酸菌资源，以采自内蒙古包头北部地区和巴彦淖尔牧区的69份传统乳制品样品（酸牛奶、奶油、奶酪和鲜牛奶）为研究对象，运用纯培养技术和16S rRNA基因序列分析方法对样品中乳酸菌进行分离鉴定，同时采用实时荧光定量PCR（q-PCR）技术对样品中优势菌群数量进行了比较分析，结果显示：
　　利用纯培养技术从两个地区69份样品中分离获得202株乳酸菌，并运用16S rRNA基因序列分析方法将分离株鉴定为4个属16个种和亚种。
　　分离自包头地区34份样品中的78株乳酸菌分别属于12个种和亚种，即Lac.lactissubsp. lactis（18株，占分离株23.08％）、Leu.mesenteroides（18株，占23.08%）、L.plantarum（14株，占17.95%）、Leu.pseudomesenteroide（8株，占10.26%）、L.helveticus（6株，占7.69%）、L.kefiranofaciens（5株，占6.41%）、L.paracasei（3株，占3.85%）、E.faecium（2株，占2.56%）和E. faecali、E.durans、L.buchneri、Leu.lactis各1株（分别占1.28%）。其中以Lac. lactissubsp.lactis和Leu.mesenteroides为优势菌群。
　　分离自巴彦淖尔地区35份样品中的124株乳酸菌分别属于12个种和亚种，即Lac.lactissubsp. lactis（48株，占分离株38.71%）、L.plantarum（32株，占25.81%）、Leu.mesenteroides（22株，占17.74%）、L.paracasei（6株，占4.84%）、L.helveticus（5株，占4.03%）、L.rhamnosus（3株，占2.42%）和L.brevis、L.diolivorans各2株（分别占1.61%），且Leu.pseudomesenteroide、E.durans、E.sulfurous、L.buchneri各1株（分别占0.81%）。其中以Lac.lactissubsp.lactis和L. plantarum为优势菌群。
　　应用q-PCR技术分析比较样品中优势菌群的数量发现，包头地区酸牛奶和奶油中Lac.lactissubsp. lactis、L.plantarum数量显著高于奶酪的(p<0.05)，酸牛奶中Leu.mesenteroides数量显著高于奶油和奶酪的(p<0.05)；巴彦淖尔地区酸牛奶和奶油中Leu. mesenteroides、L.plantarum数量显著高于奶酪的(p<0.05)，酸牛奶中Lac.lactis subsp.lactis的数量显著高于奶油和奶酪的(p<0.05)；两个地区不同样品中各优势菌群的数量关系均为Lac.lactissubsp.lactis>L.plantarum>Leu.mesenteroides。
　　该项研究中由于包头和巴彦淖尔地区地理距离较近，气候和地理环境相似，牧民生活习惯相近，传统乳制品的制作工艺相同，故这两个地区传统乳制品中分离到的乳酸菌菌种和优势菌群相近，但不同样品中优势菌群的数量存在显著差异(p<0.05)。

目录

略 缩 语 表

1 引言

1.1 乳酸菌概述

1.1.1 乳酸菌

1.1.2 乳酸菌的益生作用

1.1.3 传统乳制品中乳酸菌菌群结构

1.1.4 传统乳制品中乳酸菌的研究进展

1.2 传统乳制品中乳酸菌分类学研究方法

1.2.1 16S rRNA基因序列分析技术

1.2.2 其它用于乳酸菌分类研究的分子生物学技术

1.3 实时荧光定量PCR技术

1.4 立题意义及研究内容

1.4.1 立题意义

1.4.2 研究内容

2 材料与方法

2.1 试验材料

2.1.1 样品来源

2.1.2 试验试剂

2.1.3 试验引物

2.1.4 试验仪器设备

2.2 试验方法

2.2.1 样品采集

2.2.2 乳酸菌活菌计数

2.2.3 乳酸菌的分离及纯化

2.2.4 乳酸菌分离株的保存

2.2.5 乳酸菌分离株的鉴定

2.2.6 传统乳制品中优势菌群的实时荧光定量（q-PCR）分析

3 结果与分析

3.1 传统乳制品中乳酸菌组成分析结果

3.2 乳酸菌分离结果

3.3乳酸菌16S rRNA基因序列鉴定结果

3.3.1 分离株基因组DNA的提取结果

3.3.2分离株16S rRNA基因PCR扩增结果

3.3.3 16S rRNA基因序列同源性比对及系统发育树分析结果

3.4 传统乳制品中优势菌群的实时荧光定量（q-PCR）分析结果

3.4.1 传统乳制品样品中宏基因组DNA的提取结果

3.4.2 绘制标曲结果

3.4.3 传统乳制品中优势菌群的q-PCR分析

4 讨论

5 结论

致谢

参考文献

附图

作 者 简 介