溶血磷脂酰胆碱促进动脉硬化的一种新机制

摘要

溶血磷脂酰胆碱(LPC)是脂蛋白所含的一种生理活性脂质,在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)中的含量会增高30—50倍,是ox-LDL的主要生理活性脂质,也是ox—LDL很多作用的介质,如,LPC可促进血管平滑肌细胞的增殖与迁移,这一作用被视为促动脉硬化作用。阐明LPC诱导的平滑肌细胞增殖与迁移机理对研究动脉硬化发生与发展过程以及开发其治疗药物具有重要意义。
　　 本研究中以人血管主动脉平滑肌细胞(hVSMCs)做模型,阐明LPC促进细胞迁移的信号转导过程。发现LPC在磷脂酶D或自分泌运动因子(Autotaxin ATX)的作用下,可被水解为LPA,在通过LPA受体信号途径促进平滑肌细胞的迁移。LPA促细胞迁移过程被LPA受体特异性拮抗剂(Ki16425)、Gi蛋白特异性抑制剂(PTX),ERK1／2的抑制剂(PD98059)、P38的抑制剂(SB203580)所抑制。通过制作动脉硬化模型动物(雪兔),发现模型组血浆LPC的含量以及磷脂酶D的活性均有不同程度的升高,模型动物动物动脉硬化板块中Autotaxin和LPA1受体的基因表达量提高,再次证明LPC含量的增加、Autotaxin和LPA1受体表达量以及Autotaxin或磷脂酶D活性的提高与动脉硬化有密切关系。
　　 结论:(1)在血管平滑肌细胞内LPC促细胞迁移的信号转导途径是LPC-Autotaxin(或磷脂酶D)-LPA-LPA1-Gi—P38和ERK。
　　 (2)动脉硬化模型动物实验表明,LPC含量的增加、Autotaxin和LPA1受体表达量以及Autotaxin或磷脂酶D活性的提高与动脉硬化(血管平滑肌细胞增殖与迁移)有密切。

目录

文摘

英文文摘

英文缩略词表

引言

第一章 细胞迁移实验

一、材料和方法

1.1 材料和设备

1.2 实验方法

二、结果

2.1 Ki16425对LPA促进的平滑肌细胞迁移的抑制

2.2 PTX对LPA促进的平滑肌细胞迁移的抑制

2.3 PD98059和SB203580对LPA促进的平滑肌细胞迁移

三、讨论

第二章 Autotaxin酶活性的测定

一、材料和方法

1.1.材料和设备

1.2 实验方法

二、结果

三、讨论

第三章 荧光定量PCR测定mRNA含量

一、材料和方法

1.1 材料和设备

1.2 实验方法

二、结果

2.1 细胞总m RNA提取

2.2 LPA受体在血管平滑机细胞(AoSMCs)中的表达

2.3 动物模型中LPA受体表达量

三、讨论

第四章 蛋白质印迹(western blot)实验

一、材料和方法

1.1 材料和设备

1.2 实验方法

1.3结果

1.3.1 LPA、LPC诱导的NF-kB磷酸化

1.4 讨论

第五章 雪兔动脉硬化模型实验验

一、材料和方法

1.1 实验动物及试剂

1.2 方法

二、结果

2.1 动脉硬化斑块的观察

2.2 病理切片光镜观察

2.3 雪兔血液生化指标变化情况

2.4 薄层层析法分离

2.5 LPC含量的测定

2.6 磷脂酶D活性的测定

三、讨论

结论

参考文献

在校期间发表的论文

致谢

文献综述

参考文献