人胰岛素原乳腺特异表达转基因细胞和转基因小鼠模型的制备

摘要

利用非胰岛β细胞生产胰岛素一直生物合成胰岛素研究领域的热点，胰岛素原在胰岛β细胞中主要通过PC1/3，PC2和CPH三种酶加工成有活性的胰岛素。研究发现，PC1/3酶在哺乳动物乳腺细胞中广泛表达。
　　本研究合成了两条经过修饰得人胰岛素原基因，Seq-662、Seq-792，以及未经过修饰的胰岛素原基因，Seq-663。构建乳腺特异表达载体662-PBC-1、663-PBC-1、792-PBC-1。利用人乳腺癌细胞系，BCAP-37制备转基因细胞，分离单细胞来源细胞65株，其中携带外源基因的细胞23株。选取其中的662-B4、663-4和792-F三株进行诱导、刺激人胰岛素原基因的表达显示，在相同诱导时间内，不同转基因细胞中人胰岛素原基因的表达，随着葡萄糖刺激浓度的不断增加，但是不同细胞对于葡萄糖的反应存在不同。综上所述，本研究构建了2个修饰的人胰岛素原乳腺表达载体，并且检测发现，他们能够在细胞和个体水平很好的诱导表达人胰岛素原基因。这将为今后在大动物乳腺中生产人胰岛素提供理论基础。

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摘要

缩略词表

引言

1 材料

1．1 主要仪器设备

1．2 主要材料、试剂及耗材

1．3 细胞培养液、诱导液以及刺激液的配制

2 方法

2．1 人类乳腺癌细胞BCAP-37的培养

2．2 人胰岛素原乳腺特异性表达载体的构建

2．3 BCAP-37细胞转染、单克隆培养

2．4 人胰岛素原转基因BCAP-37细胞的鉴定

2．5 BCAP-37细胞的诱导刺激及鉴定实验

2．6 原核显微注射技术制备人类胰岛素原转基因小鼠

2．7 转基因小鼠的鉴定及不同组织中人胰岛素原基因的表达分析

2．8 转人胰岛素原基因HST胎儿成纤维细胞制备

2．9 统计方法

3 实验结果

3．1 人乳腺特异性表达载体662-PBC1、663-PBC1以及792-PBC1的构建及鉴定

3．2 人类乳腺癌细胞系BCAP-37的转染及挑取单克隆实验

3．3 人类乳腺癌细胞BCAP-37阳性单克隆测序鉴定

3．4 转基因小鼠鉴定

4 讨论

参考文献

文献综述 人胰岛素及其生物合成研究进展

致谢

攻读硕士期间发表的论文