乳腺特异高表达人促红细胞生成素转基因奶山羊的制备

摘要

目的 制备乳腺特异性高表达人促红细胞生成素(hEPO)转基因奶山羊.方法 采用牛β-乳球蛋白基因(BLG)调控元件和hEPO全长编码序列基因组DNA构建真核表达载体,应用受精卵原核注射的方法制备hEPO转基因山羊.结果 在原核注射获得的188头羔羊中,经Southern blot法检测有4头羊含有hEPO基因,其中3头为母羊,1头公羊于出生后20 d死亡;3头转基因母羊hEPO基因的拷贝数分别为1、10、2;Western blot检测结果显示转基因羊乳中的hEPO分子质量为32 kDa;MTT法检测结果表明,在泌乳10 d的3只转基因羊乳汁中,每毫升乳汁中hEPO活性分别达到1.17×102 IU、1.90×104 IU、1.91×104 IU.结论 牛BLG能够调控hEPO基因在山羊乳腺中高表达,为实现其他药用蛋白在山羊乳腺中表达奠定了基础.