环氧合酶-2抑制剂Rofecoxib抑制小鼠视网膜新生血管形成的实验研究

摘要

目的：研究环氧合酶-2(cyclooxygenase-2COX-2)是否在氧诱导的鼠视网膜新生血管上表达及COX-2抑制剂Rofecoxib是否抑制视网膜新生血管的形成及其作用机制。 方法：第一部分：出生后7d的C57BL/6J幼鼠28只随机分成正常对照组14只，在正常空气环境下饲养10天。给氧组14只，在高氧环境下饲养5天，然后回到正常空气环境下饲养5天。荧光素血管灌注观察视网膜血管形态，HE染色计数与内界膜有关系的血管内皮细胞核。免疫组织化学检测视网膜中COX-2、VEGF蛋白表达；RT-PCR检测COX-2和VEGFmRNA。 第二部分：同日出生的2窝C57BL/6J小鼠各10只，随机分为治疗组和未治疗组。同时置于高氧环境下饲养5天后，在正常环境中饲养，治疗组每日1次腹腔注射COX-2抑制剂Rofecoxib15mg/kg，未治疗组注入等量的生理盐水，连续5d。荧光素血管灌注观察视网膜血管形态，HE染色计数与内界膜有关系的血管内皮细胞核。免疫组织化学检测视网膜中COX-2、VEGF蛋白表达；RT-PCR检测COX-2和VEGFmRNA。 第三部分：取传代的人脐静脉血管内皮细胞随机分为正常组和缺氧组，免疫细胞化学染色法检测：正常氧环境和缺氧环境培养24h细胞，VEGF、HIF-1α、COX-2、NF-КB的表达。MTT比色法测定细胞增殖率。用Western-blot和RT-PCR测定不同缺氧时间VEGF、HIF-1α、COX-2、NF-КB蛋白和mRNA的表达。Rofecoxib干预：量-效关系组，Rofecoxib取15、30、65、100、150μmol/L5个浓度组，置于缺氧环境中培养24h。时-效关系组，Rofecox-ib取65μmol/L浓度，选取缺氧6、12、24、48h4个时间点观察。用Western-blot和RT-PCR测定VEGF、HIF-1α、COX-2、NF-КB蛋白和mRNA的表达。PGE2干预：取Rofecoxib浓度为65μmol/L细胞，分别加PGE2浓度为0.1、1、10μmol/L后置于缺氧环境中培养24h。用Western-blot和RT-PCR测定VEGF、HIF-1α、NF-КB蛋白和mRNA的表达。 结论：在视网膜新生血管形成中存在COX-2、VEGF的高表达，且两者表达呈显著正相关。环氧合酶-2抑制剂rofecoxib可明显抑制小鼠视网膜新生血管形成。血管内皮细胞缺氧时，HIF-1α主要是在基因水平上诱导VEGF表达上调。NF-КB在基因水平调控COX-2、VEGF的表达。COX-2抑制剂rofecoxib主要通过COX-2-VEGF途径，呈剂量和时间依赖性抑制缺氧诱导血管内皮细胞的VEGF表达。rofecoxib浓度和作用时间达到一定程度时也可通过COX-2-HIF-1α-VEGF途径抑制HIF-1α的表达，下调VEGF。前列腺素(PGE2)可能是COX-2-HIF-1α-VEGF途径和COX-2-VEGF途径中一重要介质。

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论文一 环氧合酶-2和血管内皮生长因子在视网膜新生血管中的表达及意义

论文二 环氧合酶-2抑制剂Rofecoxib抑制小鼠视网膜新生血管形成的实验研究

论文三 环氧合酶-2抑制剂Rofecoxib抑制缺氧条件下血管内皮细胞VEGF表达的机制研究

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 细胞因子与血管新生

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