β1-整合素介导激活蛋白激酶C-α促进肝癌细胞的核转录因子κB表达及侵袭和转移

摘要

目的： 肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)是威胁人类生命健康的最主要的恶性肿瘤之一，深入探讨HCC的发病机制和分子生物学机理将成为决定其治疗成功与否的重要突破口。作为细胞赖以生存的局部环境，细胞外基质(ExtracellularMatrix，ECM)及其所传递的信号对维持正常细胞的形态与功能以及诱导肿瘤细胞的发生与发展起着至关重要的作用。β1-整合素(β1-integrin)家族被认为是介导ECM信号的最主要的细胞表面受体，系统研究β1-integrin信号转导通路无疑是了解ECM对HCC影响的关键，也是研究者多年来希望解决的问题。蛋白激酶C(Protein Kinase C，PKC)及其所调控的相关转录因子也可以促进肿瘤细胞的增殖并抑制其凋亡，而PKC及其相关转录因子的这种重要的调节功效又在一定程度上受到β1-integrin的影响，本项目的研究目的即是对β1-integrin信号转导通路中活化的相关的PKC同工酶进行探讨及定位，从细胞信号转导的角度，进一步明确β1-integrin．信号转导通路中级联反应的效应因子，完善此反应的链式结构，为阐明ECM促进HCC发生发展的机制提供分子水平的理论基础。 方法： 通过细胞转染实验，将空载体瞬时转染质粒(pEGFP-N1)、β1-integrin表达瞬时转染质粒(pEGFP-N1/GFβ1A)分别成功转染入HepG2细胞，利用Tanswell体外侵袭实验、Western印记实验、免疫组化染色实验、EMSA实验及PKCa特异性抑制剂G06976的抑制实验，观察β1-integrin对HepG2细胞的PKCα活性、NF-kB的表达及细胞侵袭力的影响以及在G06976干预下由β1-integrin诱导的PKCa活化、NF-kB的表达及肝癌细胞侵袭力的变化情况。 结果： pEGFP-N1质粒、pEGFP-N1/GFβ1A质粒转染HepG2细胞48h后，荧光显微镜下见细胞生长旺盛，呈明显绿色荧光。RT-PCT实验验证转染成功。β1-integrin表达质粒转染后的HepG2细胞的侵袭力明显增加，与空载体质粒转染后的HepG2细胞相比差异显著(P<0.05)。Western印记实验、免疫组化染色实验结果显示β1-integrin促进HepG2细胞PKCa活化，并促进了PKCa胞浆→胞膜的移位。EMSA结果显示，β1-integrin促进HepG2细胞NF-kB的活化。Go6976明显抑制β1-integrin诱导的PKCa的活化，同时也抑制β1-integfin介导NF-kB的活性及细胞侵袭力。 结论： β1-integrin介导激活了PKCa的活性，进而诱导了NF-kB的表达，导致肝癌细胞侵袭力的增加，促进肿瘤细胞的侵袭和转移。这一通路的发现，其意义在于，其有利于加深我们对HCC细胞中β1-integrin信号转导通路结构的认知，加强对于HCC发生发展中β1-integrin功能的理解，更为重要的是，将有助于彻底明确ECM信号在HCC发生发展中的作用机制，从而对最终阐明诱导HCC发生发展的驱动因素和枢纽环节具有深刻意义，也必将为开发相应的治疗策略并大幅度提高HCC的治疗效果开辟一条崭新的途径。

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材料和方法

实验结果

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述：肝细胞癌的发病机制和分子生物学机理研究进展

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