糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞TLR4表达的研究

摘要

目的：
　　 TOLL样受体(Toll-like receptors,TLRs)是新近发现且备受关注的一种细胞跨膜受体及病原识别受体(pattern recognition receptors,PRR),在天然免疫中通过对病原体相关的分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMP)的识别发挥作用,是天然免疫和获得性免疫的桥梁。近期TLRs信号传导途径在糖尿病及其并发症的发生发展中所起的作用成为研究的热点。实验证实糖尿病患者单核细胞中TLR2,TLR4的表达增加,肺泡巨噬细胞在清除吸入性抗原及致病微生物方面等都具有重要的作用,故本实验以肺泡巨噬细胞为研究对象观察TLR4在正常大鼠及糖尿病4周,8周大鼠肺泡巨噬细胞表达的变化,探讨糖尿病机体免疫防御能力变化的发生机制。
　　 材料与方法：
　　 1、动物模型制备及分组健康雄性Wistar大鼠24只,SPF级,鼠龄12周,体重(200±20)克,购于中国医科大学实验动物室。随机分为3组:正常对照组(A组,n=8),糖尿病4周组(B组,n=8),糖尿病8周组(C组,n=8)。糖尿病组一次性腹腔注射链脲佐菌素60mg/kg体重,对照组注射同等剂量枸橼酸-枸橼酸钠缓冲溶液,72小时后随机血糖≥16.67mmol/L,为复制糖尿病模型成功。
　　 2、肺泡巨噬细胞的获取与培养BALF离心后沉淀细胞加入含10％小牛血清、10万单位/L青霉素、10万单位/L链霉素的RPMI1640培养液,放入事先放有盖玻片的60mm培养皿中,充分混匀后在37℃,5％CO2,饱和湿度的培养箱内孵育2小时,使臣噬细胞贴壁,弃去非贴壁细胞。
　　 3、免疫细胞化学染色观察TLR4在各组大鼠肺泡巨噬细胞表达的变化将贴有巨噬细胞的盖玻片用4％多聚甲醛固定30分钟,PBS洗片后采用免疫细胞化学染色SABC法染色。各组切片用Meta-Morph/DP10/BX41显微图像分析系统测定阳性细胞单位面积平均光密度值。
　　 4、统计分析
　　 数据采用SPSS13.0统计软件处理,实验数据用(x)±s表示,各组间指标比较用单因素方差分析,P＜0.05为差异有统计学意义。
　　 实验结果：
　　 免疫细胞化学染色结果正常组大鼠肺泡巨噬细胞可见弱的TLR4表达,以胞浆及胞膜为主呈较淡的棕黄色改变;糖尿病4周组细胞TLR4在上述部位的表达增多,在胞浆及胞膜呈会黄色改变;糖尿病8周组细胞的胞浆及胞膜呈深棕黄色改变,部分细胞胞核形态不规则。
　　 分析结果：
　　 糖尿病4周组TLR4表达较正常组明显增加,差异显著(P＜0.05);糖尿病8周组TLR4表达较糖尿病4周组增加更为显著(P＜0.05)。
　　 结论：
　　 1、糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞TLR4表达较正常大鼠明显增高。
　　 2、随糖尿病病程进展,TLR4表达增强,推测TLR4在糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞的免疫防御反应中发挥着重要作用。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:英文缩略语

前言

材料与方法

实验结果

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 TOLL样受体的研究进展

在学期间科研成绩

致谢

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