达沙替尼联合卡铂对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

摘要

目的:
　　 卵巢癌是致死率最高的妇科恶性肿瘤，其发病率占女性生殖系统恶性肿瘤第二位。由于对卵巢癌缺乏有效的早期诊断手段，因此，大多数卵巢癌患者被确诊时已属晚期。目前对于晚期卵巢癌的治疗，主要是以手术联合铂类等化疗药物为主，结合一些免疫治疗及综合治疗，但是仍有多数患者最终会出现卵巢癌的复发并随着疾病进展而死亡，其中大多数病例在治疗后的两年内复发，所以卵巢癌患者死亡率很高，晚期患者5年生存率仅为15％左右，因此，积极寻找和探索有效的化疗药物极为重要。
　　 达沙替尼(Dasatinib)是一种Src家族的淋巴细胞酪氨酸激酶(lymphocyte cellkinase，LCK)抑制剂，为替尼类ABL和SRC激酶双重抑制剂。达沙替尼能结合SFK家族(SRC、LCK、LYN、FGR、BLK、FYN、YES和HCK)等多种激酶均有抑制作用，抑制下游目标基因的自动磷酸化，从而发挥抗肿瘤作用，同时达沙替尼对于c-kit、EphA2和PDGFR-B，也有抑制作用。酪氨酸激酶抑制剂可抑制其活性及破坏肿瘤细胞的信号传导，抑制肿瘤细胞增殖和新生血管形成，间接抑制肿瘤的生长，而对正常细胞影响较小。达沙替尼是近年抗肿瘤药研究的热点，近几年研究显示达沙替尼可以抑制许多的实体瘤包括皮肤、乳腺、骨、肺、结肠、前列腺、头和颈、胰脏等。本实验基于达沙替尼的多种作用机制，研究了达沙替尼联合卡铂对卵巢癌OVCAR3、H08910细胞生长抑制和凋亡的影响，并从细胞凋亡方面初步探讨其作用机制，为达沙替尼联合卡铂的临床应用提供实验依据。
　　 Eph属于受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinases，RTKs)超家族中最大的一个亚族，EphA2是Eph受体之一，近来研究显示，EphA2在多种肿瘤组织中高表达，进一步的研究证实EphA2过表达促进良性肿瘤向恶性发展。因其在正常及肿瘤组织中表达的差异性，加之其有别于其他RTKs的结构及功能的特异性，目前EphA2被认为是一个很有潜力的靶点，正成为各种肿瘤防治研究的焦点。
　　 方法:
　　 1、人卵巢癌OVCAR3、HO8910细胞系分别用达沙替尼、卡铂单药组及两药联合用药组不同浓度处理培养48h。
　　 2、MTT法检测人卵巢癌OVCAR3、HO8910细胞系分别用达沙替尼、卡铂单药组及两药联合用药组在不同浓度及同一时间条件下处理48h，观察细胞生长抑制作用。
　　 3、通过AnnexinV/PI双染流式细胞仪检测达沙替尼、卡铂单药组及两药联合用药组，不同药物浓度及同一时间对培养人卵巢癌OVCAR3、HO8910的细胞系，检测细胞凋亡的影响。
　　 4、人卵巢癌OVCAR3、HO8910细胞系在达沙替尼、卡铂单药组及两药联合用药组不同药物浓度的条件下处理48h，Westem blotting方法检测EphA2蛋白表达含量。
　　 结果:
　　 1、MTT结果显示，在单药达沙替尼组、卡铂组各0.1-20μmol/L不同浓度范围内，作用于人卵巢癌OVCAR3、HO8910细胞48h后，细胞的生长抑制率呈剂量依赖性。其中达沙替尼1μmol/L、卡铂1μmol/L单独用药组作用48h后，对OVCAR3、H08910细胞生长的抑制作用，实验组高于对照组有显著统计学差异(P＜0.05)。达沙替尼与卡铂联合用药组浓度为0.1μmol/L对人卵巢癌OVCAR3、H08910细胞作用48h后，实验组细胞生长抑制作用显著高于对照组，有显著的统计学差异(P＜0.05）。研究显示了在同一时间段，药物浓度的不同，抑制率不同，说明联合用药组的细胞生长抑制率要更强于单药组。
　　 2、AnnexinV/PI双染流式细胞仪检测结果显示，经达沙替尼、卡铂单用药组1μmol/L作用于0VCAR3、HO8910人卵巢癌细胞株48h后，各单药组与对照组相比具有显著差异有统计学意义（P＜0.05）。达沙替尼、卡铂联合用药组0.1μmol/L作用于0VCAR3、HO8910人卵巢癌细胞株48h后，联合用药组与对照组相比，随着用药浓度的增加，其细胞凋亡率呈现明显增强的趋势，单药组及联合组诱导卵巢癌细胞的凋亡率均较对照组增高(P＜0.05)。且联合用药组明显高于单药组，差异有统计意义（P＜0.05）。
　　 3、Westem blotting方法检测人卵巢癌OVCAR3、HO8910细胞分别在达沙替尼、卡铂单药组浓度梯度为(0.1、1、10和20μmol/L)作用48h后，随着药物浓度增加EphA2蛋白表达逐渐减弱。各实验组与对照组相比较均有统计学意义(P＜0.05)。达沙替尼、卡铂在联合用药组浓度梯度为(0.1、1μmol/L)作用48h后，且两药联合应用浓度越增加，EphA2蛋白表达水平越低。联合用药组与对照组间比较均有统计学意义(P＜0.05)。达沙替尼、卡铂单药组和达沙替尼、卡铂联合用药组均与对照组相比提示两药联合用药组细胞抑制率高于单用药组。
　　 结论:
　　 针对达沙替尼联合卡铂可能有效的抑制人卵巢癌OVCAR3、HO8910细胞中EphA2蛋白表达，诱导细胞凋亡，并在一定程度上抑制细胞生长。

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论文 达沙替尼联合卡铂对卵巢细胞增殖和凋亡的影响

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综述 Epha2、达沙替尼与卵巢肿瘤

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