银屑病患者血清IL-21表达情况及IL-21刺激HaCaT细胞增殖的研究

摘要

前言：
　　 银屑病,是一种常见的慢性复发性炎症性疾病,其主要病理表现为角质细胞增殖分化异常,角化不全,研究发现,银屑病皮损中浸润的单一核细胞对角质细胞的增殖分化有一定影响,其中最重要的是T淋巴细胞。白细胞介素-21(IL-21)由活化的CD4CT细胞(特别是炎症性的Th17细胞亚群)和自然杀伤性T细胞分泌,其在多种自身免疫性疾病中高表达,有研究证实银屑病患者皮损中IL-21表达量较正常高,离体情况下IL-21可以促进角质形成细胞增殖,而其在银屑病患者血液中的表达尚不清楚,为此,我们将通过研究IL-21在银屑病患者血液中表达情况及其对HaCaT细胞是否有促增殖作用,探讨IL-21在银屑病发病中的可能机制。
　　 材料和方法：
　　 一、研究对象
　　 (一)病例组
　　 银屑病患者31例,均来中国医科大学附属第一医院住院患者,其中男22例,女9例,年龄21-57岁,平均年龄36岁。
　　 (二)对照组
　　 健康志愿者16例,其中男8例,女8例,年龄20-55岁,平均年龄34岁。
　　 患者及志愿者入组前均签署知情同意书。
　　 (三)入组标准
　　 1、年龄＞60岁或＜20岁
　　 2、近三个月未用免疫抑制性药物
　　 3、无肿瘤及其他自身免疫性基础疾病
　　 4、近两周无感染史
　　 5、疾病处于进展期
　　 二、试剂
　　 人IL-21检测ELISA试剂盒购自R&D公司。重组人IL-21(rIL-21)购自美国Peprotech公司,CCK8购自Ribeiro同仁化学研究所。DMEM高糖培养液、胎牛血清、PBS及1％青链霉素购自美国Hyclone公司,DMSO购自solarbio公司。
　　 三、方法
　　 (一)EUSA法检测血清IL-21的含量
　　 取银屑病患者及健康志愿者外周静脉血,离心分离血清,操作步骤参照试剂盒的说明书进行。
　　 (二)HaCaT细胞准备
　　 将液氮冷冻的HaCaT细胞复苏后培养于培养瓶,按时换液传代,调整细胞密度为2×106/L。
　　 (三)细胞培养
　　 将上述调整密度后的HaCaT细胞培养于96孔板中,每孔1ml,每个培养条件设10个复孔,在IL-21浓度分别为30ng/ml、50ng/ml、70ng/ml及100ng/ml条件下置于37℃、50ML/LCO2孵箱中培养。
　　 (四)细胞增殖程度分析
　　 不同刺激条件下的HaCaT细胞培养48小时后,加入CCK-8(10μl)置于37℃、50ML/LCO2孵箱中分别培养2小时后,酶标免疫检测仪测OD(450nm)值。
　　 结果：
　　 1、病例组较对照组血清中IL-21的含量明显升高
　　 与对照组相比,病例组血清中IL-21的含量显著升高。
　　 2、IL-21刺激HaCaT细胞的增殖情况
　　 IL-21可明显刺激HaCaT细胞增殖。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:英文缩略语

前言

材料与方法

实验结果

讨论

结论

本研究创新性自我评价

参考文献

综述:IL-21与银屑病

致谢

个人简历

附表1、银屑病患者一览表

附表2、正常人一览表