摘要：目的与背景:通过分析HCV抗原对巨噬细胞表达CD100的影响,并分析HCV引起免疫细胞失活的内在机制.材料与方法:应用单核/巨噬细胞系THP1为细胞模型,分别以HCVcc、HCV core、NS3/4刺激细胞,通过qPCR检测CD100、A20、ABIN1、MMP14及相关因子的表达水平,分析HCV抗原对THP1细胞的表达影响.构建含有A20/EGFP和ABINl/EGFP的双基因共同表达腺病毒载体,转染THP1细胞,荧光观察其表达状况,流式细胞仪检测腺病毒感染的表达水平变化,在优化条件下使A20和ABIN1在THP1细胞中过表达,观察其对CD100的表达影响.分析CD100表达变化的影响因素.结果:HCV不同抗原对CD100的表达影响不尽相同.从总体上看,HCV促使CD100在巨噬细胞中的表达量下降.其中,HCVcc的刺激作用较弱而NS3/4抗原的刺激性最强.同时,实验构建了AD-A20,AD-ABIN1两个表达载体,通过荧光显微镜及流式细胞仪分析确定了腺病毒感染最佳条件,在THP1细胞中过表达A20和ABIN1两种蛋白,发现无论A20或ABIN1的过表达都会引起CD100水平的上升.实验又进一步分析了HCV抗原对A20、ABIN1的表达影响,发现HCV抗原刺激可上调这两种蛋白表达的.讨论与结论:HCV感染可从初期的急性感染转变到慢性感染阶段,说明机体对HCV感染的免疫应答具有阶段性的特点.感染初期,人体免疫系统主要针对HCV病毒颗粒进行应答;后期随着病毒在肝内的感染复制,包括HCV core及NS3、NS4等更多的HCV抗原在肝脏中出现.而人体针对这些混合抗原的不同应答方式,很可能成为HCV慢性感染建立的必要条件.本文通过分析不同的HCV抗原对巨噬细胞CD100的表达影响,从一个侧面反应出HCV逃逸免疫系统的内在机制.CD100作为一种重要的免疫系统活化因子,其表达下降可能引起免疫系统功能受损.在本实验中,不同抗原对CD100的影响程度不同,HCVcc作为正常感染中最早出现的抗原,其对CD100表达的影响较弱.相反,在HCV第二轮感染才会出现的HCV core及NS3、NS4抗原有很强的下调巨噬细胞CD100表达水平的作用.这在一定程度上反应出HCV core及NS3/4对免疫系统可能产生的负面影响.另一方面,NF-Kb作为免疫系统中重要的信号通路,可能在CD100调控中发挥关键性作用,我们构建了NF-Kb通路调控分子的过表达载体ad-A20及ad-ABIN1.实验证明,HCV抗原可上调A20、ABIN1在巨噬细胞中的表达水平,同时,无论过表达d-A20或ad-ABIN1都能抑制CD100的表达水平.由于A20、ABIN1可形成复合物抑制NF-Kb信号通路,而CD100是NF-Kb的下游调控基因之一.即HCV抗原特别是HCVcore和NS3/4对CD100的下调作用很可能是通过上调NF-Kb信号通路抑制性因子A20实现的ABIN1.
