骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠小肝综合症的实验研究

摘要

目的
　　 探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)移植对大鼠小肝综合征的治疗作用,以及通过研究肝脏组织中RhoA蛋白及mRNA表达的变化,阐明小肝综合征与Rho-ROCK通路的关系,以及MSCs是否可以通过Rho-ROCK通路影响肝脏修复过程中RhoA的表达来促进肝功能的恢复,为进一步研究骨髓间充质干细胞移植治疗小肝综合征的作用机制提供新的实验依据。
　　 方法
　　 用全骨髓贴壁法分离纯化大鼠BMSCs,将其传代培养至第三代,用Brdu行BMSCs细胞标记。建立肝大部切除(切除肝左叶、中叶及尾状叶,保留肝右叶,切除肝脏体积约约85%)的大鼠小肝综合征模型,实验组将标记的骨髓间充质干细胞(MSCs)制成悬液,约0.1ml1.5×106个/0.1ml,于手术后经门静脉缓慢注入。对照组为手术后经门静脉注入等量的PBS溶液。空白对照组(假手术组)为游离肝周韧带后关腹。分别于术后1,4,7,14天将鼠处死,取血清行肝功能检测,观察肝功能指标的变化情况。取肝脏组织,观察肝脏组织的大体及病理变化情况。行免疫组织化学检测移植的MSCs细胞在受体大鼠肝内的分布、存活情况,以及肝脏组织内RhoA的蛋白表达,Real-TimePCR检测肝脏组织内RhoA的mRNA表达情况。对比实验组与对照组肝功能的差异性以及RhoA的mRNA表达量是否有统计学意义。
　　 结果
　　 HE染色提示实验组大鼠肝脏病理损害程度降低,肝再生明显。实验组肝功能(1天2256.33+±428.90vs2923.00±740.35;4天1880.67±256.75vs2660.00±632.86;7天1255.67±319.27vs1853.67±268.56;14天543.33±167.46vs948.67±671.67)恢复情况明显好于对照组,和对照组相比有统计学差异P＜0.05;实验组肝组织中RhoA表达量明显低于对照组,RhoA在第4d和7d表达水平与其他时间有显著差异,且与对照组相比较,对照组RhoA表达水平更高,4d的表达水平最高,差异具有统计学意义(4天2.99vs4.10;7天1.84vs2.96,P＜0.05),对照组与实验组在第1d及14dRhoA表达水平无显著差异(1天3.33vs4.91;14天1.50vs2.26,P＞0.05).
　　 结论
　　 骨髓间充质干细胞移植可以促进小肝综合征大鼠的肝功能恢复,可改善受损肝脏功能,促进肝细胞增殖,促进肝再生。实验组肝组织中RhoA表达量明显低于对照组,表明Rho-ROCK信号转导通路参与小肝综合征发生、发展和修复全过程。BMSCs可能通过抑制RhoA-ROCK信号转导通路加速受损肝脏修复。初步揭示了骨髓间充质干细胞小肝综合征的治疗作用,为临床治疗小肝综合征提供新的理论依据。