P2Y受体在涎腺腺样囊性癌细胞中的表达及其激动剂作用的研究

摘要

背景和目的：腺样囊性癌(Salivary adenoid cystic carcinoma，SACC)是最常见的涎腺恶性肿瘤之一，也是口腔颌面部最具特征的恶性肿瘤，具有很强的浸润性和远处转移力，手术切除后常有复发和转移。其转移和复发的机制目前尚不清楚。三磷酸腺苷(Adenosine Triphosphate，ATP)是一种递质，作为细胞外的信号分子(第一信使)，通过激活细胞表面的两类受体(P2X和P2Y)，并通过第二信使系统调节多种生理反应。P2Y受体(G蛋白偶联型)在体内各种组织广泛分布，功能各异。不同亚型的P2Y受体通过G蛋白激活不同的胞内信号转导通路，执行特定的生理功能。Rapaport首先报道嘌呤核苷酸具有抗癌活性。目前研究表明，ATP能够抑制多种人类肿瘤细胞的生长，如前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、肝癌、卵巢癌、胃癌等，还有研究表明ATP能够减轻非恶性组织对化疗和放疗的抵抗性。西方国家，ATP应用于晚期癌症治疗已进行了小规模的临床试验。ATP抗癌机制的报道，除了激活细胞表面受体和第二信使系统调节作用，余未见报道。有文献报道，ATP通过激活癌细胞表面的嘌呤受体P2Y可以抑制某些癌细胞的体外增殖。然而，腺样囊性癌与嘌呤受体P2Y2之间的关系目前尚未见报道。 本实验则采用免疫细胞化学的方法，来证实腺样囊性癌细胞表面P2Y<,2>受体的存在，同时通过ATP作用于体外培养的腺样囊性癌细胞来研究ATP对于非高转移腺样囊性癌细胞株(SACC-83)和高转移腺样囊性癌细胞株(SACC-LM)的抑制作用，为以后进一步研究腺样囊性癌的转移和浸润机理奠定基础。 方法：本研究对人涎腺腺样囊性癌细胞株SACC-83和SACC-LM进行体外培养，采用免疫细胞化学法检测P2Y<,2>受体在SACC-83和SACC-LM细胞株中的表达；采用倒置显微镜观察不同浓度ATP作用后的细胞形态学及数目的变化；采用四甲基偶氮唑蓝(Methyl thiazolyltetrazolium，MTT)法测定SACC-83和SACC-LM细胞分别在不同浓度ATP(0mM/L、0.1mM/L、0.2mM/L、0.4mM/L、0.8mM/L，和1.6mM/L，)作用和不同时间点(24h、48h和72h)的细胞增殖抑制变化的情况。 结果：免疫细胞化学结果显示，腺样囊性癌细胞株SACC-83和SACC-LM细胞中P2Y2嘌呤受体成阳性表达，可见细胞膜上呈深棕褐色染色(阳性)，胞浆呈浅棕褐色(弱阳性)，而阴性对照组则无阳性表达。SACC．83和SACC-LM细胞间未见明显差异。显微镜观察结果显示，细胞数目随ATP浓度升高而递减。MTT法结果表明，ATP对SACC-83细胞和SACC-LM细胞的增殖有明显的抑制作用(P<0.05)，对SACC-LM细胞的抑制作用强于对SACC-83细胞的抑制作用，且其抑制作用与药物浓度和作用时间呈正相关，即随ATP浓度的增加和作用的时间延长，对细胞的抑制率增加。 结论：(1)P2Y<,2>嘌呤受体在SACC-83和SACC-LM两株细胞中均有表达，且两细胞株间未见明显差异。(2)ATP对SACC-83细胞和SACC-LM细胞的增殖有抑制作用，其抑制率与剂量和时间呈正相关，对SACC-LM的抑制作用强于对SACC-83的抑制作用，但其作用机制有待进一步研究。(3)ATP作为一种有效的抗癌药具有很好的开发前景。

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前言

材料和方法

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讨论

结论

参考文献

综述 P2Y 受体与恶性肿瘤

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