荧光原位杂交技术检测膀胱癌分子细胞遗传学变异的临床应用研究

摘要

荧光原位杂交技术（简称FISH技术）是20世纪80年代末在已有放射性原位杂交技术基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传学技术，与传统的放射性标记原位杂交相比，荧光原位杂交具有安全、快速、灵敏度高、检测信号强、杂交特异性高、能同时显示多种颜色等优点。目前FISH技术已成功应用到许多生物材料中，包括细胞、组织切片、中期染色体、高分辨率染色体及分离核酸等，更是在细胞遗传学、肿瘤生物学、基因定位、基因作图、基因扩增、产前诊断及哺乳动物染色体进化研究等领域得到了广泛应用。膀胱癌是泌尿系统中最常见的恶性肿瘤，多数为移行上皮细胞癌，在我国泌尿生殖系肿瘤中，其发病率占首位，且术后易复发。膀胱镜检查和细胞形态学检测是诊断及监测膀胱癌最重要的二种手段。然而，细胞形态学检测敏感性低，膀胱镜检查病人痛苦，难以接受。从尿液中检测与膀胱癌发生相关的抗原虽灵敏性高于细胞形态学检测，但特异性较低，不能成为可靠的诊断指标。 目的：国外的研究显示FISH技术诊断膀胱癌的敏感性高于尿脱落细胞学，特异性与尿脱落细胞学相当，在我国尚无与此试剂盒相关的研究结果报告。然而，中国人群的膀胱癌遗传学改变也因其身体素质．生活习惯．饮食习惯及生存环境等的不同与西方国家人群存在差异。因此，有必要建立符合国人的膀胱癌遗传学改变资料，并探索是否也可用尿液中细胞进行以上遗传学改变的检测，进而早期诊断膀胱癌的可能性。本课题旨在中国人群中进行FISH技术研究，这一研究将为中国人群膀胱癌非创伤性．非痛苦性且高特异性．高灵敏性的早期诊断方法的建立提供理论依据。 方法：本实验用GLPP16/CSP17（位点特异性探针）探针进行实验。收集100例膀胱癌疑似患者的新鲜尿液，同步进行尿脱落细胞学检查和FISH检测17号染色体、9号染色体p16位点，计算出检测后的细胞信号点数量，统计学分析FISH的敏感性、特异性及与膀胱癌发生及发展的关系。另收集20例健康人群的新鲜尿液作为对照组，用FISH检测17号染色体、9号染色体p16位点异常，并计算出检测后的细胞信号点数量，从而统计出相应阈值。 结果：100例膀胱癌疑似患者的尿液经GLPP16/CSP17探针FISH检测后分析：阳性77例，阴性8例，假阳性2例，假阴性11例，怀疑2例，敏感度87．5%，特异度80．0%。100例膀胱癌疑似患者的尿液经尿脱落细胞学检查结果为：阳性48例，阴性5例，假阳性1例，假阴性30例，怀疑16例。敏感度61．5%，特异度83．3%。FISH检测与尿脱落细胞学检查的敏感度比较具有非常显著性差异（X2=14．983，P<0．01）；特异度上在两者间无显著性差异（X2=0．0274，P>0．05）；在阳性率上比较两者间具有非常显著性差异（X2=17．941，P<0．01）。FISH检测的敏感度随膀胱癌分级的增高而呈升高的趋势（趋势检验=4．66，P<0．05）。 结论：本实验研究说明FISH技术在诊断膀胱癌的灵敏性及特异性上均具有优势，GLPP16/CSP17这组探针虽然存在假阴性以及假阳性，但是其高敏感度及特异度能够弥补尿脱落细胞检查以及膀胱镜检查存在的缺陷，总之FISH技术能为中国人群膀胱癌提高早期诊断及监测膀胱癌预后的一种新方法。

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声明

综述：FISH技术检测膀胱癌分子细胞遗传学变异的临床价值

前言

材料和方法

结果

讨论

结论

附图

参考文献

致谢