应用微阵列技术研究乳腺癌HER-2基因状态和蛋白的表达

摘要

目的： 应用组织微阵列组（Tissue Microarray Group TMAG）和细胞核微阵列（Nucleus Microarray NMA）技术，通过免疫组化（Immunohistochemistry IHC）和荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH）分别检测乳腺癌组织中HER-2基因状态和蛋白表达，观察两种检测结果相互关系及临床意义。 材料和方法： 1．研究材料：收集沈阳军区总医院2006年6月～2008年8月诊断明确的乳腺癌标本，共248例，均为女性，年龄31～84岁，平均48．3岁。 2．制作TMAG和IHC染色：将来源不同的（TissuemicroarrayTMA）切片排列在同一张载玻片上，同时缩小相邻组织芯的距离，增加组织芯的数量，制成TMAG。采用S-P法进行IHC染色。IHC染色结果参照美国FDA标准：光镜下观察以细胞膜棕黄染色为阳性，分为IHC-～+++。结果判断以IHC+++为阳性，-～++级染色为阴性。 3．制作NMA和FISH染色：对石蜡包埋组织进行较厚的切片，经脱蜡及消化，从中提取出完整的细胞核。将提取细胞核的悬液滴注在预制的石蜡模孔中，然后细胞核固定、脱蜡便制成细胞核微阵列。NMA较好的适用于荧光原位杂染色。FISH探针为混合探针，标记整个HER-2基因序列为橙色荧光；另一个标记17号染色体着丝粒基因序列为绿色荧光。检测结果是列出20个间期细胞核中HER-2拷贝数与着丝粒的比率，乳腺癌HER-2扩增的病例橙色荧光与绿色荧光信号比率大于或等于2．0；正常的细胞核两种信号比率小于2．0；结果在临界点（1．8～2．2）时应视为可疑。 4．统计学处理：两种方法检测结果的相关性分析用SPSS11．5统计软件包进行x2检验。 结果： 1．IHC检测结果：248例乳腺癌标本中，IHC-为90例，IHC+为49例，IHC++为37例，IHC+++为72例。根据IHC结果判断标准，阳性72例，阴性176例，阳性率为29．0%。 2．FISH检测结果：248例乳腺癌病理标本中，FISH阴性172例，FISH阳性76例，FISH阳性率为30．6%。 3．IHC与FISH的结果比较：在IHC+++的72例中，有59例为FISH阳性；IHC-～++的176例标本中，有159例为FISH阴性。IHC与FISH检测结果总符合率为87．9%，IHC与FISH检测结果两者之间存在显著性相关性。IHC++与FISH检测结果无明显相关性（P>0．01）。 4．17号染色体单体型染色体与多倍体型IHC++中4例为17号染色体单体型染色体，其FISH检测均为阳性，占FISH阳性病例总数5．26%。IHC+++中5例17号染色体多倍体型染色体，FISH检测均为阴性，占FISH阴性总例数2．9%。 结论： 1．TMAG和NMA技术适用于乳腺癌组织的IHC和FISH检测。同样具有结果同一性好、准确和低成本的优点。 2．乳腺癌IHC为-～+和+++情况时，IHC与FISH检测结果有良好的一致性。 3．乳腺癌IHC++时，需进行FISH检测HER-2基因状态，同时要排除是否为17号染色体单倍体，避免不必要的靶向治疗。 本研究的创新之处1本实验把TMAG/NMA技术应用到普通石蜡包埋乳腺癌组织的IHC和FISH检测，拓展了乳腺癌检测条件。 2．提出IHC++病例进行FISH检测，区分17号染色单倍体以免造成不必要靶向药物治疗。 本研究存在的不足：本实验没能对全部病例进行长期随访，不能得出更多有意义的结论。

目录

文摘

英文文摘

声明

综述 组织微阵列技术的研究进展

前言

材料和方法

结果

讨论

结论

本研究的创新之处

参考文献

附录

致谢