前B细胞克隆增强因子(PBEF)在急性胰腺炎肺损伤大鼠肺组织中的表达与功能及清胰汤干预的实验研究

摘要

目的:本实验将通过观察前B细胞克隆增强因子(Pre-B-cellcolony-enhancing factor,PBEF)在重症急性胰腺炎(severe acutepancreatitis,SAP)肺损伤(acute lung injury,ALI)模型大鼠肺组织中的表达及功能,并观察清胰汤对SAP大鼠肺脏PBEF表达的影响。从新的角度揭示重症急性胰腺炎相关肺损伤的发病机制,同时探讨清胰汤的治疗作用机理,为临床上中西医结合治疗重症急性胰腺炎提供进一步理论基础。
　　 方法:健康Spraghe-Dawley(SD)大鼠144只,体重200-220g,雄性,随机分为6组(SAP模型组,假手术组,地塞米松组,铃兰欣组,善宁组,清胰汤治疗组)每组24只,每组随机分为造模6h,12h,24h三个时相典亚组,各时相点亚组8只。SAP组和药物干预组开腹后用无损伤动脉夹夹闭胰胆管入肝门处,逆行胰胆管缓慢注入1.5％的去氧胆酸钠溶液(1ml/kg),取出动脉夹,关腹,建立SAP时ALI模型。地塞米松组于造模后立即静脉注射一次及造模后12h再次静脉注射一次,剂量:1ml/kg。善宁组于造模后立即静脉注射一次及造模后12h再次静脉注射一次,剂量20μg/kg。铃兰欣组于造模后立即静脉注射一次及造模后12h再次静脉注射一次,剂量2mg/kg。清胰汤组造模后胃管注入中药煎液及造模后12h再次灌胃一次,剂量:10ml/kg。假手术组常规剖腹后翻动胰腺,关腹。分别于造模后6h、12h、24h处死相应时相点大鼠,取肺组织及动静脉血做病理检查和各项指标检测。
　　 采用双抗体夹心(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法测定大鼠血清中PBEF含量,免疫组化检测其在肺组织中的表达及组织定位;RT-PCR法检测肺组织中PBEFmRNA表达Western Blotting法检测肺组织中PBEF蛋白含量;鲎试剂偶氮基质显色法定量检测血清内毒素含量;放免法检测TNF-α,IL-1β,IL-8在肺组织中的表达:真空干燥法测定肺湿干重(W/D)比值;全自动生化分析仪检测动脉血气;酶法测血清淀粉酶(AMY),大体及镜下观察肺脏病理学改变。
　　 结果:
　　 1.模型组血清PBEF含量升高、PBEFmRNA及其蛋白出现高表达,TNF-α,IL-1β,IL-8和IL-8均明显高于假手术组。同时,模型组病理学表现为明显的肺损伤,肺W/D比值、血中内毒素、血中AMY等指标均较假手术组显著升高(p＜0.01)。清胰汤、地塞米松、善宁可以下调血清PBEF、PBEFmRNA及其蛋白表达,减轻肺损伤程度,而铃兰欣作用不明显。
　　 2.清胰汤组血中内毒素、TNF-α,IL-1β,IL-8等指标下降显著(p＜0.05)。善宁组抑制血中AMY作用最强((p＜0.05)。地塞米松组对改善肺W/D比值、PaCO2、PaO2作用明显。
　　 结论:
　　 1.应用1.5%的去氧胆酸钠逆行胰胆管内注射,大鼠的胰腺充血水肿明显,血清AMY、肺W/D、PaCO2的指标明显升高,随着时间的推移逐渐增高,较相同时相点假手术组显著增高PaO2呈现相反变化。还可见肺组织水肿、充血、炎细胞浸润,表明重症急性胰腺炎合并肺损伤的模型复制成功。
　　 2.重症急性胰腺炎相关肺损伤时,内毒素水平升高,PBEF表达过度上调,进而启动TNF-α,IL-1β,IL-8和IL-8等炎性细胞因子的大量表达,在SAP相关ALI发病中起着十分重要的作用。
　　 3.中药清胰汤通过下调PBEF的表达,减缓肺泡巨噬细胞的过度激活,减少TNF-α,IL-1β,IL-8和IL-8炎性细胞因子的大量表达,减少中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophil,PMN)聚集,降低血中高水平的内毒素和AMY浓度、降低肺泡通透性等多个方面机制对肺组织起到保护作用。
　　 4.善宁、地塞米松可以不同程度下调PBEF的表达,通过不同途径对不同指标产生影响,从而实现对ALI某种程度的保护作用。5.中、西药物在SAP相关ALI发病的不同环节中,起着十分重要的作用,各有所长,中西医结合理论指导下的中西药联合应用,将会为临床SAP相关ALI的防治提供新的有效途径。