Oct4在ES来源神经前体细胞向神经元分化中的作用研究

摘要

目的:
　　 应用慢病毒RNA干扰方法抑制ES来源神经前体细胞Oct4基因表达，以观察Oct4基因在ES来源神经前体细胞向神经元分化中的作用。
　　 方法:
　　 首先利用293T细胞包装Oct4干扰慢病毒，再次用“五步法”诱导小鼠胚胎干细胞向神经元分化，进入扩增期后给予Oct4干扰RNA，采用Real-timePCR方法检测干扰后细胞Oct4表达情况，最后进行分化计数，免疫组化鉴定分化后的细胞，计数分化后的新生神经元比例。
　　 结果:
　　 本实验中Oct4干扰慢病毒可以有效的转入ES来源神经前体细胞，使Oct4表达下降约40％，诱导分化后正常组细胞分化出神经元约75.5±5.2％，GFP组分化出神经元约73.8±4.7％，Oct4干扰RNA组生成神经元约33.8±2.9％。由SPSS10.0软件进行统计学分析可得，空白对照组与GFP组相比，P＞0.05，无统计学意义;空白对照组与Oct4干扰组相比，P＜0.01，有显著的统计学意义;GFP组与Oct4干扰组相比，P＜0.01，有显著的统计学意义。
　　 结论:
　　 利用慢病毒可以将Oct4siRNA有效的转入神经前体细胞中，使ES来源神经前体细胞Oct4表达显著降低。证实了在ES来源神经前体细胞中依然表达着Oct4基因，Oct4基因不仅是维持干细胞全能性的重要因子，它对于ES来源向神经前体细胞向神经元分化也是必不可少的。