降血尿酸乳酸菌筛选及乳杆菌对高血尿酸血症大鼠作用的研究

摘要

目的:
　　 1.从55株来自大连医科大学微生态学教研室菌种保藏库的乳酸菌中筛选出对核苷具有较快分解速率的菌株，通过生物学特性评价，选择DM9218作为最优菌株。
　　 2.观察DM9218对高尿酸血症模型大鼠的干预效果。
　　 3.对DM9218进行初步安全性评价。
　　 方法:
　　 1.高效降解核苷乳酸菌株的筛选，生物学特性评价
　　 基于RP-HPLC方法，通过检测含有肌苷、鸟苷的反应液在接种乳酸菌并培养60min后，反应液中肌苷与鸟苷含量变化，筛选出若干株对核苷具有最快分解速率的菌株做为候选菌株。
　　 候选菌株生物学特性评价包括耐酸、耐胆盐试验，候选菌株的胆盐耐受驯化实验，耐消化道酶类（胃蛋白酶、胰蛋白酶）实验，抑菌实验，抗生素敏感实验，产H2O2能力实验及HT-29细胞粘附性实验等部分，根据以上实验结果，确定最优目的菌株。
　　 2.最优目的菌株对高尿酸血症模型大鼠的干预效果研究
　　 将清洁级Wistar大鼠随机分五组:正常对照组，高尿酸血症模型组，乳酸菌低剂量组，乳酸菌高剂量组，别嘌呤醇干预组。在造高尿酸血症模型的同时对大鼠进行乳酸菌菌悬液灌胃，于实验第0、7、14d采血，测定血浆中尿酸(UA)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)含量。
　　 3.最优目的菌株初步安全性评价
　　 最优目的菌株初步安全性评价实验包括以下三个部分:急毒实验，质粒检测及细菌易位判断。
　　 4.对最优目的菌株进行菌种鉴定
　　 对最优目的菌株进行16SrDNA测序，结合生化鉴定确定其种属性。
　　 结果:
　　 1.自55株供试乳酸菌株中筛选出4株具有较高核苷分解速率的菌株:DM9218、DM9242、DM9505、DM9514。
　　 对这四株候选菌株进行的生物学特性评价结果表明，DM9218拥有最大的核苷分解速率，经驯化后可耐受胃肠道环境，具有一定的抑菌能力，对多种抗生素敏感，细胞粘附性良好;因此选择DM9218做为最优菌株，进行后继实验研究。
　　 2.菌株DM9218对高尿酸血症模型大鼠的干预实验结果表明，DM9218低剂量的血尿酸含量明显低于高尿酸血症模型组(P＜0.05)，明显高于别嘌呤醇干预组(P＜0.05)，DM9218高剂量组的血尿酸含量明显低于高尿酸血症模型组(P＜0.05)，明显低于DM9218低剂量组(P＜0.05)，明显高于别嘌呤醇干预组(P＜0.05);各组血尿素氮含量差异不显著(P＞0.05);各组血肌酐含量差异不显著(P＞0.05)。
　　 3.菌株DM9218不含有质粒，在正常情况下不会发生细菌易位，菌株DM9218无急毒性。
　　 4.经16SrDNA测序结合生化鉴定结果表明，DM9218为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)。
　　 结论:
　　 通过对55株供试乳酸菌的定向筛选，筛选出一株菌DM9218，它具有最高的体外降解核苷能力，不含有质粒，正常情况下不会发生细菌易位，不具有急毒性。动物实验表明:DM9218菌株对Wistar大鼠的高尿酸血症具有一定的防治作用。16SrDNA测序表明:DM9218菌株为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)。

目录

声明

摘要

前言

材料和方法

一、实验材料

(一)实验对象

(二)主要试剂及耗材

(三)主要仪器

(四)主要试剂配制

二、实验方法

(一)目的菌株的筛选方法

(二)候选菌株生物学特性评价

(三)DM9218对高尿酸血症模型大鼠干预

(四)DM9218初步安全性评价

结果

(一)乳酸菌筛选结果

(二)候选菌株生物学特性评价结果

(三)DM9218对高尿酸血症模型大鼠干预结果

(四)DM9218初步安全性评价结果

讨论

结论

参考文献

综述

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