急性白血病中HMGB1及相关血管内皮生长因子表达水平研究

摘要

目的:本文旨在研究急性白血病(Acuteleukemia，AL)患者血清中高迁移率族蛋白B1（Highmobilitygroupbox1protein，HMGB1）和相关血管内皮生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)VEGFA、VEGFC及其相关受体VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3的表达水平，探索急性白血病进展的相关新因素，为补充新的治疗方法提供理论基础。
　　 方法:(1)收集2012年3月至10月大连医科大学附属二院血液科住院急性白血病患者血清71例，其中包括初发未治患者34例，完全缓解27例，复发难治10例。在71例中急性非淋巴细胞白血病(Acutenonlymphocyticleukemia，ANLL)患者为42例（M11例，M29例，M316例，M41例，M59例，M66例），其中初发未治患者20例，完全缓解18例，复发难治4例;急性淋巴细胞白血病(Acutelymphoblasticleukemia，ALL)患者为29例（L112例，L217例），其中初发未治患者14例，完全缓解者9例，复发难治6例。所有患者均经临床、外周血象、骨髓细胞形态学及细胞化学染色检查确诊，符合国内诊断及疗效标准，全部病例均除外合并心、肝、肾功能异常以及合并急慢性感染，除外合并其他恶性肿瘤和自身免疫性疾病，除外合并妊娠。在71例中男性37例，女性34例，年龄14-79岁，中位年龄46岁。正常对照30例，均为大医二院体检中心体检健康者，其中男性14例，女性16例，年龄16-75岁，中位年龄47岁。
　　 (2)所有血清均来自于待测者清晨空腹抽取静脉血3ml，放入含有枸橼酸钠的抗凝管中，室温静置2小时，1000r/min离心20分钟，取血清，约1ml，放入EP管中分装，-20℃保存待测。
　　 (3)双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)是利用抗体包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入标准品或标本，其中的抗体与连接于固相载体上的抗体结合，然后加入生物素化的抗体，将未结合的生物素化抗体洗净后，加HPR标记的亲和素，再次彻底洗涤后加入TMB底物显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗体呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
　　 (4)本试验采用ELISA测定血清中HMGB1、VEGFA、VEGFC、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3含量。
　　 结果:1.通过测定各组AL血清中HMGB1的水平，发现初发未治组、复发难治组HMGB1水平明显高于正常对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)，完全缓解组血清HMGB1含量较初发未治组明显下降，与正常对照组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)，复发难治组血清HMGB1含量明显高于正常对照组和完全缓解组，差异均有统计学意义(P＜0.05)。ANLL组初发未治组HMGB1(517.17±477.49)pg/ml，完全缓解组HMGB1（88.66±75.74）pg/ml，复发难治组HMGB1（1016.25±978.49）pg/ml，ALL组初发未治组HMGB1（659.98±479.55）pg/ml，完全缓解组HMGB1（73.75±47.44）pg/ml，复发难治组HMGB1（677.00±354.10）pg/ml，正常对照组为（15.87±15.98）pg/ml。
　　 2.通过测定AL各组血清中VEGFA、VEGFC、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3的水平，发现在ANLL组中，初发未治组血清中VEGFA、VEGFR1、VEGFR3水平明显高于正常对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)，完全缓解组血清VEGFA、VEGFR1、VEGFR3含量较初发未治组明显下降，但与正常对照组比较，差异无统计学意义(P＞0.05);初发未治组和完全缓解组血清中VEGFR2水平明显高于正常对照组，差异有统计学意义(P＜0.05，P=0.05)，初发未治组和完全缓解组比较差异无统计学意义(P＞0.05);初发未治组、完全缓解组及正常对照组血清中VEGFC均不表达。在ANLL组中，VEGFA初发未治组为(559.60±542.92)pg/ml，完全缓解组为(21.24±21.47)pg/ml，正常对照组为（92.46±42.35）pg/ml;VEGFR1初发未治组为(0.30±0.09)ng/ml，完全缓解组为(0.15±0.11)ng/ml;正常对照组为(0.04±0.03)ng/ml;VEGFR2初发未治组为(1.53±0.34)ng/ml，完全缓解组为(1.30±0.10)ng/ml，正常对照组为(0.44±0.56)ng/ml;VEGFR3初发未治组为（13.05±4.21）ng/ml，完全缓解组为(3.13±1.71)ng/ml，正常对照组为(2.62±1.31)ng/ml。
　　 在ALL组中，初发未治组血清中VEGFR2、VEGFR3水平明显高于正常对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)，完全缓解组血清VEGFR2、VEGFR3含量较初发未治组明显下降，与正常对照组比较，差异无统计学意义(P＞0.05);初发未治组血清中VEGFA、VEGFR1水平与缓解期、正常对照组比较，差异均无统计学意义(P＞0.05，P＞0.05);初发未治组、完全缓解组及正常对照组血清中VEGFC均不表达。在ALL组中，VEGFA初发未治组为(473.27±469.87)pg/ml，完全缓解组为(74.96±50.62)pg/ml，正常对照组为（92.46±42.35）pg/ml;VEGFR1初发未治组为(0.29±0.19)ng/ml，完全缓解组为(0.06±0.03)ng/ml，正常对照组为(0.04±0.03)ng/ml;VEGFR2初发未治组为（1.49±0.32）ng/ml，完全缓解组为(0.04±0.03)ng/ml，正常对照组为(0.44±0.56)ng/ml;VEGFR3初发未治组为(13.68±6.99)ng/ml，完全缓解组为(5.37±2.40)ng/ml，正常对照组为(2.62±1.31)ng/ml。
　　 3.在ANLL中，初发未治组血清HMGB1分别与VEGFA、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3做相关性分析，结果无相关，(r值分别为-0.400、-0.099、-0.053、0.089;P＞0.05)。
　　 在ALL中，初发未治组血清HMGB1分别与VEGFA、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3做相关性分析，结果无相关，(r值分别为-0.029、0.005、-0.67、0.179;P＞0.05)。
　　 结论:HMGB1在急性白血病患者血清中表达水平异常升高，血清HMGB1含量在ANLL、ALL初发未治组及复发难治组中增高，而在经治疗完全缓解后明显下降，其水平变化与病情进展程度相关，因此，HMGB1可能成为临床诊断急性白血病及判断治疗后病情转归的参考指标。VEGF及其受体在ANLL和ALL血清中存在异常表达，ANLL中，初发未治组患者血清的VEGFA、VEGFR1、VEGFR3表达水平明显高于缓解组和正常对照组。在ALL组中，初发未治组患者血清VEGFR2、VEGFR3的表达水平明显高于缓解组和正常对照组。在ALL组和ANLL组中VEGFC均不表达。可推测VEGF及其受体可用来监测急性白血病的发展，为判断急性白血病的预后提供更有价值的依据。在ANLL和ALL组中初发未治组血清HMGB1分别与VEGFA、VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3做相关性分析，发现HMGB1与上述指标无相关性。

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摘要

正文

前言

材料和方法

1．检测对象

2．主要试剂与仪器

3．实验方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述

致谢