柠檬草精油对苯并[a]芘致人胚肺成纤维细胞氧化应激及DNA损伤的影响

摘要

目的:通过检测柠檬草精油(LEO)在苯并[a]芘(BaP)染毒人胚肺成纤维(HELF)细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)、BaP、3-羟基苯并[a]芘(3-OHBaP)、反式二氢二醇环氧苯并[a]芘-DNA复合物(BPDE-DNA)的含量，研究其变化规律并评价LEO对BaP致HELF细胞氧化应激和DNA损伤的作用，初步探索LEO成为肺癌化学预防的可能性。
　　方法:1.细胞培养与染毒:以HELF细胞为靶细胞，采用完全随机设计的体外培养实验。设0.5％、1.0％和2.5％ LEO剂量组和25μM BaP剂量组，以0.1％二甲基亚砜(DMSO)为溶剂对照组。实验随机分为4组:①溶剂对照组;②BaP单独作用组;③LEO单独作用组;④LEO和BaP联合作用组:同时加入各个浓度的LEO和BaP共同培养24 h。细胞处理结束后，收集细胞沉淀（内液）及上清液（外液），-80℃保存。2.应用气相色谱-质谱联用(GC/MS)技术对LEO的化学成份进行分析鉴定。3.通过MTT法检测LEO和BaP对HELF细胞存活率的影响，应用BCA法蛋白定量试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、过氧化氢酶(CAT)试剂盒、微量丙二醛(MDA)试剂盒和人8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)酶联免疫分析试剂盒对细胞内液中SOD、CAT、MDA、8-OHdG的含量进行测定。4.建立高效液相色谱-荧光检测内标法，测定细胞内外液中BaP、3-OHBaP和BPDE-DNA的含量。
　　结果:(1) LEO的主要成份为柠檬醛，其中橙花醛和香叶醛的相对含量分别为37.45％和31.33％。(2)与溶剂对照相比，BaP单独染毒时，可引起HELF细胞存活率显著减少（P≤0.01）;与BaP单独作用相比，0.5％和1.0％ LEO联合处理组，细胞存活率增加，且在LEO浓度为0.5％时有显著差异性（P≤0.01）。与溶剂对照相比，BaP单独染毒可引起HELF细胞SOD，CAT含量显著减少(P≤0.01)且MDA、8-OHdG含量显著增加（P≤0.01）;与BaP单独作用相比，各剂量联合处理组SOD、CAT显著增加（P≤0.01）而MDA、8-OHdG均显著减少（P≤0.01），以上指标均都不存在剂量依赖效应。(3)应用高效液相色谱-荧光检测内标法在细胞内外液中仅检测出BaP的含量，而未检测出3-OHBaP和BPDE-DNA的含量。与BaP单独作用相比，各剂量联合处理组细胞内外液中BaP含量均增加。
　　结论:一定剂量的LEO能使BaP诱导的HELF细胞存活率增加，氧化应激减轻，细胞DNA损伤减弱，提示LEO有抗氧化功能且对BaP引起的氧化应激及DNA损伤有保护作用。LEO有望成为肺癌化学预防的新来源。