柠檬草精油对苯并[a]芘致小鼠肺组织损伤保护作用的研究

摘要

目的:本实验通过检测苯并[a]芘(B[a]P)亚慢性染毒小鼠肺组织中苯并[a]芘代谢物[3-羟基苯并[a]芘(3-OHB[a]P)、(+)-anti-7，8-二氢二醇-9，10-环氧苯并[a]芘(BPDE)-DNA加合物]、氧化应激相关指标(SOD、CAT、MDA、T-AOC、8-OHdG)、p53和bcl-2基因和其表达蛋白的含量，来探讨柠檬草精油(lemon-grass essentialoil，LEO)对B[a]P亚慢性染毒致小鼠肺组织损伤的保护作用和机制。
　　方法:1.小鼠分组与实验模型的建立。实验小白鼠，均为雄性，分别分组，共计288只。实验用小鼠在22±2℃标准条件下驯化试验，相对湿度10％，正常喂养。实验用小鼠随机分成9组，分别为正常组、对照组、精油低浓度组(0.05％)、精油中浓度组(0.1％)、精油高浓度组(0.25％)、B[a]P单独处理组、B[a]P+精油低浓度组(0.05％)、B[a]P+精油中浓度组(0.1％)、B[a]P+精油高浓度组(0.25％)。B[a]P单独处理组、B[a]P+精油低浓度组、B[a]P+精油中浓度组、B[a]P+精油高浓度组，上述四组小鼠给予B[a]P溶液灌胃，每只每次0.2mL。小鼠雾化吸入相应浓度的柠檬草精油，每天30min。实验过程中小鼠体重变化各组之间无显著性差异，实验结束后处死小鼠前称重各组，小鼠体重略有增加。饲养3个月后处死小鼠，取出小鼠肺组织，分成两等份:一份称重后制成组织匀浆液待用，另一份于-80℃冷冻保存备用。每组随机抽取2只小鼠肺组织制作病理切片。2.实验相关指标测定。使用试剂盒的方法对小鼠肺组织匀浆中SOD、CAT、MDA、T-AOC、8-OHdG的含量进行测定。使用高效液相色谱法(HPLC)对小鼠肺组织匀浆中3-OHB[a]P和(+)-anti-BPDE-DNA的含量进行测定。显微镜下观察免疫组化和病理切片。应用实时荧光定量PCR、western blot、免疫组织化学技术在基因和蛋白质水平上检测p53和bcl-2基因的表达。
　　结果:1.试剂盒测试结果:与对照组相比B[a]P单独处理可引起小鼠肺组织中的SOD、CAT和T-AOC的含量减少（P＜0.05），同时MDA、8-OHdG含量增加(P＜0.05);与B[a]P染毒组相比，3组LEO保护组中的SOD、CAT和T-AOC增加(P＜0.05)，而MDA、8-OHdG均减少(P＜0.05)。2.HPLC结果:与对照组相比，B[a]P单独处理组小鼠肺组织中3-OHB[a]P和(+)-anti-BPDE-DNA的含量增加(P＜0.05);与B[a]P单独染毒组相比，3组LEO保护组中3-OHB[a]P的含量增加(P＜0.05)，而(+)-anti-BPDE-DNA的含量减少(P＜0.05)。3.病理及免疫
　　组化结果:小鼠在亚慢性染毒3个月后，小鼠的肺组织细胞出现了细胞损伤和凋亡的改变，单独给与柠檬草精油处理的3组小鼠肺组织的病理及免疫组化的结果与空白对照组并无明显差异。4.分子生物学实验结果:与对照组相比，B[a]P单独处理组中p53基因和bcl-2基因表达上调(P＜0.05);而与B[a]P染毒组比较，3组LEO保护组中p53基因表达上调趋势增强(P＜0.05)，bcl-2基因表达上调趋势减弱(P＜0.05)。
　　结论:1.柠檬草精油可以减轻B[a]P造成小鼠肺组织的氧化应激损伤，具有抗氧化、保护肺组织的作用。2.柠檬草精油可以使用B[a]P诱导的小鼠肺组织中致癌物质(+)-anti-BPDE-DNA减少，具有降低B[a]P致癌作用的代谢物3-OHB[a]P增多。3.柠檬草精油可以使p53基因的表达上调同时可以使Bcl-2基因的表达下调，具有抑制细胞癌变的作用。

目录

声明

摘要

1．前言

2．实验器材和方法

2．1．材料与仪器

2．2．实验动物

2．3．实验方法

3．结果

3．1 试剂盒结果

3．2 HPLC结果

3．3 病理及免疫组化结果

3．4 PCR结果

3．5 Western结果

4．讨论

4．1 氧化应激

4．2 HPLC的结果讨论

4．3 病理及免疫组化

4．4 基因表达结果分析

5．结论

参考文献

综述 肺损伤机制中氧化应激的研究现状

致谢