声明
摘要
前言
材料和方法
1.细胞培养
2.肿瘤标本获取及处理
3.质粒瞬时转染
4.siRNA瞬时干扰
5.microRNA mimic瞬时转染
6.microRNA抑制性瞬时干扰
7.总RNA提取和反转录
8.实时荧光定量PCR
9.载体构建
10.构建稳定转染细胞株
11.蛋白免疫印迹法
12.免疫荧光
13.苏木素-伊红染色法(HE染色)
14.CCK8细胞增殖检测
15.动物实验
16.原代细胞分离及培养
17.细胞乳酸含量测定
18.细胞葡萄糖摄取量测定
19.细胞ATP生成量测定
20.细胞PDH活性测定
21.活细胞分选实验
22.细胞微球体形成实验
23.BrdU染色实验
24.细胞周期检测实验
25.双荧光素酶报告基因检测实验
26.生物信息分析及统计学分析
结果
1、PDKI对乳腺癌细胞的干性维持起重要作用
2、低氧条件下PDK1基因激活糖酵解促进肿瘤干细胞特性
3、低氧条件下H19促进糖酵解和乳腺癌肿瘤干细胞特性
4、沉默PDK1抑制H19介导的糖酵解过程和肿瘤干细胞特性
5、H19通过调节HIF-1α促进PDK1基因的表达
6、阿司匹林通过降低H19和PDK1的表达抑制糖酵解水平和肿瘤干细胞特性
讨论
结论
参考文献
综述 糖酵解限速酶对肿瘤发生发展的作用
攻读学位期间发表论文情况
致谢