基于SSR标记技术的越橘亲缘关系分析及品种鉴定

摘要

本文建立了适用于越橘（Vaccinium spp.）品种鉴定及亲缘关系分析的SSR-PCR技术体系，用SSR标记技术对22种越橘栽培品种进行了遗传差异及亲缘关系分析，建立了一套完善的越橘品种鉴定体系，为越橘种质资源的评价、鉴定、管理及越橘新品种的培育奠定了基础。
　　建立的SSR-PCR反应程序为:94℃预变性4min;94℃40s，55～64℃（根据引物而定）40s，72℃40s，35个循环;72℃延伸8min。优化的SSR-PCR反应体系为:20μL体系，Taq酶1.5U，Mg2+2.0nmol/μL，dNTP0.25nmol/μL，上下游引物各0.25pmol/μL，DNA模板40ng。
　　筛选出15对扩增条带清晰、多态性高、重复性好的引物。每对引物获得多态性条带3～13条，22个品种共获得115条带，其中113条为多态性条带，多态性比率为98.26％。22个品种的遗传相似性系数居于0.486～0.886之间，其中奴伊(Nui)和布鲁瑞卡(Bluereka)遗传相似性系数最大;泽西(Jersey)和美登(Blomidon)遗传相似性系数最小。使用NTSYSpc(2.10e)根据非加权组平均法（UPGMA）绘制了22个越橘品种的遗传关系聚类图。聚类结果显示，供试越橘品种被分为2个大类，美登(Blomidon)被单独聚为一类，其余的21个品种被聚为一类，此21个品种又聚为2个亚类，其中晚熟品种迪克西(Dixi)和埃利奥特(Elliot)聚在一起，另外19个中早熟品种聚在一起。说明SSR聚类结果与越橘品种遗传关系及表型特征相符。可以用于指导越橘杂交育种的亲本选配。
　　实验筛选出了可用于22个越橘品种鉴定的SSR核心引物NA961和NA1040，核心引物组合能够完全区分22个越橘品种。用核心引物制作了参照分子量标记，构建了22个越橘品种的指纹图谱，建立了一套完整的越橘品种鉴定体系。实践验证SSR标记用于蓝莓品种鉴别的方法可行、结果可靠。