RNA干扰技术对A549细胞表皮生长因子受体（EGFR）基因抑制作用的实验研究

摘要

目的： 利用RNA干扰技术，观察携带表皮生长因子受体(EGFR)同源基因的重组质粒稳定转染非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株A549细胞后对细胞表皮生长因子受体mRNA和蛋白质表达水平变化的影响；同时筛选出干扰效果较好的重组质粒，为进一步研究稳定转染后的单克隆细胞生物学特性做好准备。 方法： 根据RNA干扰原理，体外设计并合成4条靶向EGFR特异性干扰片段，即h-EGFR1、h-EGFR2、h-EGFR3、h-EGFR4，以pGensil-1为载体，分别构建重组质粒pGensil-1-EGFR-1、pGensil—1-EGFR-2、pGensil-1-EGFR-3、pGensil-1-EGFR-4。分别以Lipofectamine 2000介导转染肺腺癌细胞株A549细胞，经G418筛选后挑选出稳定转染的单克隆细胞。将所挑选出的单克隆细胞大量培养后采用RT-PCR和Western blot技术分别检测EGFR基因mRNA的转录及EGFR基因蛋白质翻译水平，并计算抑制率。 结果： 在挑选出稳定表达的单克隆细胞后，实验组pGensil-1-EGFR-1与未转染组相比EGFR表达水平无明显降低(P＞0.05)，实验组pGensil-1-EGFR-2、pGensil-1-EGFR-3、pGensil-1-EGFR-4与未转染组相比EGFR基因mRNA和蛋白质的表达水平均有明显降低(P＜0.05)，mRNA水平干扰效率分别为27.6％，45.8％，51.7％，pGensil-1-EGFR-2组与pGensil-1-EGFR-4组相比有统计学意义(P＜0.05)，pGensil-1-EGFR-3组与pGensil—1-EGFR-4组间比较二者无统计学意义(P＞0.05)。蛋白质水平干扰效率分别为34.25％，50.86％，47.07％，且这三组间比较无统计学意义(P＞0.05)。空白对照组及阴性对照组与未转染组相比EGFR基因mRNA和蛋白质的表达水平无明显差异(P＞0.05)。 结论： 利用RNA干扰技术，将4个携带表皮生长因子受体同源mRNA的重组质粒稳定转染至肺腺癌细胞A549后，其中3个能有效抑制A549细胞EGFR mRNA及EGFR蛋白质的表达，提示RNA干扰技术能影响A549细胞中EGFR基因的功能；同时本实验也筛选干扰效果较好pGensil-1-EGFR-3组与pGensil-1-EGFR-4组两个实验组，为进一步研究携带表皮生长因子受体同源mRNA的重组质粒稳定转染至肺腺癌细胞A549细胞后对A549细胞生物学影响做好准备。

目录

文摘

英文文摘

声明

第1章前言

第2章材料和方法

第3章结果

第5章讨论

结论

致谢

附图

参考文献

综述 表皮生长因子受体靶向的RNA干扰在肺癌治疗中的研究现状

攻读学位期间的研究成果