上调miR-148a表达对胰腺癌AsPC-1细胞DNMT1基因表达及细胞增殖和凋亡的影响

摘要

目的：探讨上调microRNA-148a(miR-148a)表达对胰腺癌细胞系AsPC-1的DNA甲基转移酶1基因(DNMT1)表达及其增殖和凋亡的影响，为胰腺癌的基因治疗奠定一定的实验基础。
　　 方法：利用体外已构建好的miR-148a表达质粒pcDNA3.1/pri-miR-148a转染胰腺癌AsPC-1细胞，建立稳定表达该质粒的细胞系。实验分三组：空白对照组(未转染)，阴性对照组(转染pcDNA3.1)，实验组(转染pcDNA3.1/pri-miR-148a)。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western Blot法分别检测转染前后AsPC-1细胞中DNMT1 mRNA和蛋白表达的变化；MTT法检测细胞生长状况；利用流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡的变化。
　　 结果：转染miRNA的表达质粒在胰腺癌AsPC-1细胞中稳定表达miR-148a后，与空白对照组和阴性对照组相比，实验组DNMT1 mRNA相对表达量明显低于阴性对照组和空白对照组，差异具有统计学意义(0.3336±0.0839 VS1.0016±0.0283 VS1.0000±0.0000，均P<0.05)；实验组DNMT1蛋白表达明显下调，P<0.05；细胞增殖受到抑制，第五天细胞增殖抑制率达24.7％；细胞在G0/G1期的细胞比率高达72.5％，高于空白对照组和阴性对照组中AsPC-1细胞在G0/G1期的比率(分别为63.24％和63.42％)(p<0.05)；细胞凋亡明显增多，实验组凋亡率是空白对照组的4.32倍(p<0.05)。
　　 结论：表达miR-148a的质粒pcDNA3.1/pri-miR-148a转染胰腺癌AsPC-1细胞后能下调DNMT1基因mRNA和蛋白表达水平，并抑制该细胞的增殖，促进细胞凋亡。miR-148a有可能成为治疗胰腺癌的靶基因。