上调miR-148a对胰腺癌AsPC-1细胞抑癌基因ppENK、p16和RASSF1A表达的影响

摘要

目的：
　　探讨上调 miR-148a表达对胰腺癌AsPC-1细胞抑癌基因 ppENK、p16和RASSF1A甲基化、蛋白表达及细胞增殖的影响。
　　方法：
　　利用Lipofectamine2000转染miR-148a模拟物（mimics）至胰腺癌AsPC-1细胞。实验细胞分为三组：Blank组（转染Lipofectamine作为空白对照组），mimics-NC组（转染negative mimics作为阴性对照组），mimics-148a组（转染miR-148a mimics作为实验组）。转染后72h，采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测各组细胞内miR-148a表达水平；甲基化特异性PCR（MSP）检测抑癌基因ppENK、p16和RASSF1A启动子的甲基化状态；Western Blot法检测DNMT1及ppENK、p16和RASSF1A蛋白表达水平；采用四甲基偶氮唑盐比色分析法（MTT）检测胰腺癌AsPC-1细胞体外增殖活力。
　　结果：
　　（1）mimics-148a组细胞miR-148a的表达量显著高于Blank组及mimics-NC组（4.63 vs1.00 vs0.93，均P<0.05）。（2）mimics-148a组细胞DNMT1蛋白表达量比Blank组及mimics-NC组显著降低（0.27 vs1.00 vs1.04，均P<0.05）。（3）Blank组及mimics-NC组ppENK、p16和RASSF1A基因启动子甲基化阳性，而mimics-148a组ppENK和p16基因启动子甲基化阴性，RASSF1A基因启动子部分甲基化；mimics-148a组ppENK、p16和RASSF1A蛋白表达量较空白对照组及mimics-NC组均明显升高（ppENK：2.06 vs1.00 vs1.01，p16：2.02 vs1.00 vs0.96，RASSF1A：1.95 vs1.00 vs1.09，均P<0.05）。（4）mimics-148a组AsPC-1细胞转染24h、48h、72h、96h和120h后，细胞体外增殖活力与 Blank组及mimics-NC组相比均显著减慢（均 P<0.05），各时间点细胞生长抑制率分别为4.83％、10.97%、23.36%、14.05%和10.58%。
　　结论：
　　上调胰腺癌AsPC-1细胞 miR-148a的表达后，抑癌基因 ppENK、p16和RASSF1A发生去甲基化，蛋白重新表达，并抑制癌细胞增殖，其作用机制可能与miR-148a抑制DNMT1表达有关。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

中英文缩略词表

第1章 前言

第2章 材料与方法

2.1 材料与试剂

2.2 实验方法及操作流程

2.3 统计学分析

第3章 实验结果

3.1 各组细胞内miR-148a表达水平

3.2 上调miR-148a表达对DNMT1蛋白表达的影响

3.3 上调miR-148a表达对抑癌基因ppENK、p16、RASSF1A启动子甲基化状态的影响

3.4 上调miR-148a表达对抑癌基因ppENK、p16、RASSF1A蛋白表达的影响

3.5 上调miR-148a表达对AsPC-1细胞体外增殖活力的影响

第4章 讨论

4.1 miR-148a在胰腺癌发病中的作用

4.2上调胰腺癌AsPC-1细胞miR-148a表达对DNMT1蛋白表达的影响

4.3 上调胰腺癌AsPC-1细胞miR-148a水平对抑癌基因甲基化及蛋白重表达的影响

4.4 上调胰腺癌AsPC-1细胞miR-148a水平对癌细胞增殖的影响

第5章 结论与展望

5.1 结论

5.2 展望与不足

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述: miR-148a在消化系恶性肿瘤中的研究进展