活性维生素D3对白蛋白诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响

摘要

目的:探讨活性维生素D3[1，25(OH)2D3]对白蛋白诱导的正常人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)-间充质细胞转分化过程的影响，及TGFβ1/ILK信号通路在此过程中的作用，探索1，25(OH)2D3延缓肾脏纤维化进程的可能机制。
　　方法:体外培养的HK-2细胞随机分为以下组别:A空白对照组:未加任何刺激物;B1，25(OH)2D3诱导组[10-7mol/l1，25(OH)2D3];C白蛋白诱导组（5mg/ml白蛋白）;D10-8 mol/l1，25(OH)2D3干预组[5mg/ml白蛋白+10-8 mol/l1，25(OH)2D3];E10-7mol/l1，25(OH)2D3干预组[5mg/ml白蛋白+10-7mol/l1，25(OH)2D3];F10-6mol/l1，25(OH)2D3干预组[5mg/ml白蛋白+10-6mol/l11，25(OH)2D3];G TGFβ1拮抗剂组（5mg/ml白蛋白+TGFβ1拮抗剂SB431542），以上各组均培养24h。倒置显微镜下观察HK-2形态的改变;采用RT-PCR法检测细胞TGFβ1、ILK mRNA的水平;细胞免疫荧光法检测细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达水平;ELISA法检测上清液纤连蛋白(FN)的表达水平。
　　结果:①HK-2细胞正常呈卵圆形铺路石样，白蛋白刺激后细胞胞体变长，变细，细胞间隙增大;随着1，25(OH)2D3浓度的升高，HK-2细胞形态改变程度较白蛋白诱导组逐渐减轻;②白蛋白诱导组TGFβ1、ILK mRNA较空白对照组显著升高（P均＜0.05），不同浓度1，25(OH)2D3干预组TGFβ1、ILK mRNA明显下调（P均＜0.05）;③白蛋白诱导组E-cadherin的蛋白表达较空白对照组下降，α-SMA、FN的蛋白表达上升（P均＜0.05），而在不同浓度1，25(OH)2D3干预组及TGFβ1拮抗剂组E-cadherin的蛋白表达较白蛋白诱导组显著上调，α-SMA、FN的蛋白表达显著下调（P均＜0.05），且随1，25(OH)2D3浓度升高作用更加明显。
　　结论:白蛋白可以使体外培养的HK-2细胞TGFβ1、ILK mRNA及α-SMA的蛋白表达增强， E-cadherin的蛋白表达减少，诱导肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化的发生，导致细胞外基质FN表达增加;1，25(OH)2D3呈浓度依赖性抑制白蛋白诱导的HK-2细胞转分化过程，其可能机制为1，25(OH)2D3阻断TGFβ1/ILK信号通路，最终可延缓肾脏纤维化进程，从而保护肾脏。

目录

声明

摘要

缩略词索引表

第1章 引言

第2章 材料与方法

2．1 实验材料

2．1．1 实验细胞来源

2．1．2 实验主要仪器

2．1．3 主要试剂

2．1．4 引物合成

2．1．5 主要溶液及试剂配制

2．2 实验方法与步骤

2．2．1 HK-2细胞的培养

2．2．2 实验分组

2．2．3 RT-PCR法(反转录-聚合酶反应法)检测TGFβ1 mRNA、ILK mRNA的表达

2．2．4 ELISA(酶联免疫吸附剂测定)法检测细胞上清液FN的蛋白表达

2．2．5 细胞免疫荧光法检测细胞E-cadherin、α-SMA的蛋白表达

2．3 统计学方法

第3章 结果

3．1 各组细胞形态学的变化

3．1．1 空白对照组、1，25(OH)2D3诱导组HK-2细胞形态

3．1．2 白蛋白诱导组HK-2细胞形态

3．1．3 不同浓度1，25(OH)2D3干预组HK-2细胞形态

3．1．4 TGFβ1拮抗剂组HK-2细胞形态

3．2 RT-PCR结果—TGFβ1 mRNA、ILK mRNA的表达

3．3 ELISA结果—FN的蛋白表达

3．4 细胞免疫荧光结果—E-cadherin，a-SPA的蛋白表达

第4章 讨论

4．1 蛋白尿与EMT

4．2 1，25(OH)2D3的肾脏保护作用及其与蛋白尿的关系

4．3 1，25(OH)2D3对EMT的影响及TGFβ1／ILK信号通路的作用

第5章 结论和展望

5．1 结论

5．2 不足之处与展望

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述