IL-13对人乳腺成纤维细胞在乳腺肿瘤微环境中IKK/NFκBp65表达的影响

摘要

目的:
　　乳腺癌已经排列在女性肿瘤发病的第一位，乳腺恶性转化微环境对乳腺肿瘤的发生发展起着重要作用，成纤维细胞是乳腺肿瘤微环境中最主要的基质细胞，它通过直接的细胞接触、自噬行为、分泌信息分子与微环境中的各组成成分发生交互作用，对癌变细胞的生长起着沃土或蓄电池的作用，从而影响肿瘤的发生和发展。恶性转化微环境中肿瘤相关成纤维细胞的活性调控网络是肿瘤发生等相关领域不可忽视的问题。本文探索IL-13对人乳腺成纤维细胞在乳腺肿瘤微环境中IKK/NFκBp65基因表达的影响，为进一步深入研究乳腺肿瘤的发生和发展提供理论和实验基础。
　　方法:
　　通过对人乳腺癌细胞与成纤维细胞共培养，体外模拟建立乳腺肿瘤微环境，采用实时-PCR，检测成纤维细胞IKK和NFκBp65的mRNA表达变化。运用免疫细胞化学，检测成纤维细胞IKK和NFκBp65的蛋白表达。
　　结果:
　　1.不同浓度的IL-13(5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、100ng/ml)刺激与人乳腺癌细胞MDA-MB-435共培养的人乳腺成纤维细胞Hs578Bst，采用实时-PCR检测成纤维细胞IKK和NFκ Bp65 mRNA的表达。结果显示，IL-13100ng/ml组IKK mRNA的表达与对照组比较，无显著性差异(P＞0.05)，IL-135ng/ml、10ng/ml、20ng/ml各组IKK mRNA表达上调(P＜0.05); IL-135ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、100ng/ml各组NFκ Bp65 mRNA表达上调（P＜0.05）。
　　2.不同浓度的IL-13(5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、100ng/ml)刺激非共培养的人乳腺成纤维细胞Hs578Bst，采用实时-PCR检测成纤维细胞IKK和NFκBp65mRNA的表达。结果显示，各实验组IKK mRNA的表达下调（P＜0.05）;各实验组成纤维细胞NFκBp65 mRNA的表达上调(P＜0.05）。
　　3.不同浓度的IL-13(5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、100ng/ml)的作用下，共培养的成纤维细胞IKK mRNA的表达高于非共培养的各同浓度组(P＜0.05);IL-1310ng/ml组共培养成纤维细胞NFκ Bp65 mRNA的表达高于同浓度组非共培养成纤维细胞NFκ Bp65 mRNA的表达(P＜0.05)，其它共培养组（IL-135ng/ml、20ng/ml、100ng/ml组）成纤维细胞NFκBp65 mRNA的表达均低于同浓度组非共培养成纤维细胞NFκ Bp65 mRNA的表达(P＜0.05)。
　　4.免疫细胞化学结果显示，在乳腺肿瘤细胞共培养条件下成纤维细胞IKK和NFκBp65的蛋白表达高于非共培养组(P＜0.05)。
　　结论:
　　1.乳腺肿瘤微环境和IL-13的共同作用上调人乳腺成纤维细胞IKK的表达;与人乳腺癌细胞株MDA-MB-435共培养的人乳腺成纤维细胞株Hs578BsIKK的表达高于非共培养的人乳腺成纤维细胞株Hs578Bs。
　　2.IL-13浓度为10ng/ml与乳腺肿瘤细胞微环境形成较好的协同作用;上调与人乳腺癌细胞株MDA-MB-435共培养的人乳腺成纤维细胞株Hs578BsNFκ Bp65的表达。

目录

声明

摘要

英文缩略词

第1章 前言

第2章 材料方法

2．1 材料与试剂

2．1．1 主要实验试剂

2．1．2 主要仪器设备

2．1．3 细胞株

2．1．4 引物合成

2．2 实验方法

2．2．1 细胞培养及分组

2．2．2 实时定量PCR

2．2．3 免疫细胞化学

2．3 统计学分析

第3章 实验结果与分析

3．1 细胞生长状况

3．2 总RNA提取样品的纯度与质量

3．2．1 紫外分光光度测量RNA吸光值的比值及浓度

3．2．2 琼脂糖凝胶电泳检测提取的RNA

3．3 IL-13对成纤维细胞IKK和NFκBp65 mRNA表达的影响

3．3．1 不同浓度IL-13对成纤维细胞IKK和NFκBp65 mRNA表达的影响

3．3．2 比较不同培养条件下成纤维细胞IKK和NFκBp65 mRNA的表达

3．3．3 IL-13不同时间对成纤维细胞IKK和NFκBp65 mRNA表达的影响

3．4 免疫细胞化学检测IL-13对成纤维细胞IKK和NFκBp65蛋白表达的影响

第4章 讨论

第5章 结论

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述 IKK／IκB／NFκB信号转导通路与乳腺癌的关系