TIM-1信号通路在IgA肾病大鼠发病机制中的作用

摘要

目的:
　　观察IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)大鼠和正常大鼠中T细胞免疫球蛋白与黏蛋白域基因-1(T-cell immunoglobulin domain and mucin domain-1,TIM-1)信号通路与多种T细胞亚群的表达关系，初步探讨TIM-1信号通路在IgAN发病中的作用和机制。
　　方法:
　　1.实验动物分组及实验性IgAN大鼠模型的建立：随机将20只SPF级SD雄性大鼠分为IgAN模型组及正常对照组。IgAN模型组予0.1％牛血清蛋白（BSA）溶液隔日灌胃+CCL4蓖麻油混合剂皮下注射/周+脂多糖（LPS）尾静脉注射2次，以建立大鼠实验性IgAN模型；正常对照组则以等体积PBS溶液灌胃+等体积生理盐水皮下注射及尾静脉注射。
　　2.大鼠实验性IgAN模型的鉴定及观察指标：观察大鼠一般情况及大鼠24h尿蛋白定量、血白蛋白、肾功能等指标变化，第9周末摘取大鼠肾脏行HE染色及IgA免疫荧光，以鉴定大鼠实验性IgAN模型的建立，并进行大鼠肾脏病理损伤的Katafuchi评分。同时免疫组织化学法检测两组大鼠肾组织中TIM-1，IL-4、IFN-γ及FOXP3的表达，实时荧光定量法检测两组大鼠肾组织中TIM-1 mRNA含量。
　　3.比较两组间临床指标，病理损伤Katafuchi评分，TIM-1 mRNA含量，TIM-1、IL-4、IFN-γ及FOXP3免疫组化表达半定量积分的差异，并分别分析IgAN组TIM-1 mRNA含量与临床指标、Katafuchi评分相关性及TIM-1半定量积分与IL-4、IFN-γ及FOXP3免疫组化表达半定量积分相关性。
　　结果：
　　1.两组大鼠一般情况变化；
　　IgAN模型组大鼠在实验初期一般情况对比正常对照组无明显差异，自第6周后出现萎靡、少动，体重增长减缓，第8周后上述症状加重。同时对比正常对照组体重增长情况，自第6周末大鼠体重增长明显减缓，差异无统计学意义（P>0.05）。IgAN模型组大鼠第4、9周末24尿蛋白定量显著增加，高于正常对照组，差异有统计学意义(P<0.01)；IgAN模型组大鼠第4、9周末血白蛋白显著下降，低于正常对照组，差异有统计学意义(P<0.01)；两组大鼠血肌酐均无明显升高，两组间对比差异无统计学意义（P>0.05）。
　　2.两组大鼠肾脏病理改变及肾脏病理损伤评分：
　　正常对照组大鼠肾组织IgA免疫荧光为阴性，光镜下可见正常肾小球结构，小管、间质无明显改变；IgAN模型组肾组织IgA免疫荧光则可见沿系膜区有不同程度沉积，光镜下见肾小球弥漫性轻、中度系膜增宽，系膜细胞增生，肾间质见纤维化伴炎细胞浸润。
　　大鼠Katafuchi评分为IgAN模型组（6.30±1.95）显著高于正常对照组（1.30±0.82），差异有统计学意义(P<0.01)。
　　3.免疫组织化学检测结果：
　　TIM-1在正常对照组于肾小管胞浆少量阳性表达，而在IgAN模型组于肾小球胞核和肾小管胞浆中广泛阳性表达，定量积分对比显著升高且差异有统计学意义(P<0.01)。
　　IL-4在正常对照组于肾小管胞浆少量阳性表达，而在IgAN模型组于肾小管胞浆中广泛阳性表达，定量积分对比显著升高且差异有统计学意义(P<0.01)。
　　IFN-γ在正常对照组和IgAN模型组均只在肾小管胞核中有少量阳性表达，定量积分对比差异无统计学意义（P>0.05）。
　　FOXP3在正常对照组和IgAN模型组均只在肾小球胞核中有少量阳性表达，定量积分对比差异无统计学意义（P>0.05）。
　　4.实时荧光定量法检测结果
　　IgAN模型组肾脏TIM-1 mRNA的相对表达量显著高于正常对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。
　　5.相关性分析结果
　　在IgAN模型组中，肾组织TIM-1表达量与24h尿蛋白定量及Katafuchi评分呈正相关，与血白蛋白呈负相关，但均无统计学意义（P>0.05）。
　　在IgAN模型组中，肾组织TIM-1表达量与肾组织表达IL-4呈正相关且有统计学意义（P<0.05），肾组织TIM-1表达量与肾组织表达IFN-γ呈正相关，与IFN-γ/IL-4呈负相关，与肾组织FOXP3表达无相关性，但均无统计学意义（P>0.05）。
　　结论：
　　1.本研究建立以BSA+CCl4+LPS诱导的大鼠IgAN模型，并发现TIM-1 mRNA的表达上调，且与IgAN大鼠的24尿蛋白定量，肾脏病理组织学损伤程度正相关，提示TIM-1信号通路可能参与大鼠IgAN的发病及进展。
　　2. IgAN大鼠肾组织中TIM-1与IL-4表达均上调并呈正相关，提示TIM-1信号通路可能参与调控Th2优势反应，而参与IgAN的发病。
　　3. IgAN大鼠肾组织中TIM-1的表达与IFN-γ/IL-4表达呈负相关，提示TIM-1信号通路可能通过调控Th1/Th2平衡来参与IgAN的发病。

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中英文缩略词表

第1章 引言

第2章 材料与方法

2.1 材料

2.2 方法

2.3 统计学处理

第3章 结果

3.1 两组大鼠一般情况比较

3.2 两组大鼠24h尿蛋白定量比较

3.3 两组大鼠血生化指标比较

3.4 两组大鼠肾脏病理比较

3.5 IHC法检测大鼠肾脏TIM-1、IFN-γ、IL-4、Foxp3的表达

3.6 RT-PCR检测大鼠两组大鼠肾脏TIM-1mRNA的含量

3.7 TIM-1表达与各个临床及病理指标间的相关性分析

第4章 讨论

4.1实验性IgAN大鼠模型的构建

4.2 IgAN与多种效应性T细胞关系

4.3 TIM-1与肾脏病的关系

4.4 TIM-1与IFN-γ、IL-4、Foxp3的关系

第 5 章 结论与展望

5.1结论

5.2展望

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述: TIM-1、TIM-4分子与T细胞亚群失衡研究进展