食品中赭曲霉素A的免疫组抗传感器建立的研究

摘要

赭曲霉毒素A（Ochratoxin A，OTA）污染广泛，毒性强，主要存在于农产品中，与人类健康有着密切的关系。由于OTA的巨大危害，世界各国加强了对于食品中OTA含量的严格管控。高效液相色谱法和酶联免疫吸附法是常见检测OTA的方法，但是这两种检测技术都存在一定的缺陷，如检测成本高，操作过程繁琐且需专业人士操作等。本研究为了解决这些问题，设计了检测灵敏，快速和操作简便的OTA非标记免疫阻抗传感器。
　　本研究通过Hummer方法制备氧化石墨烯，利用一步电沉积法制备层状结构还原氧化石墨烯/金纳米复合物修饰的玻碳电极，金纳米穿插于石墨烯片层中，将石墨烯架空，有效增大了复合物的比表面积。随后采用EDC/NHS分别将抗OTA驼源性纳米抗体和抗OTA单克隆抗体共价偶联于修饰电极表面，制备了OTA免疫阻抗传感器。
　　1基于OTA的单克隆抗体免疫传感器的研究
　　1.1采用Hummer方法成功制备得到氧化石墨烯，其厚度在1 nm左右。通过一步电沉积方法制备层状结构的还原氧化石墨烯/纳米金复合物修饰电极，对沉积条件的进行优化，结果为氧化石墨烯浓度0.5 mg/mL，氯金酸的浓度是1mM，循环伏安法沉积圈数为5圈。
　　1.2采用循环伏安法将还原氧化石墨烯/金纳米复合物一步沉积至电极表面，并共价偶联抗OTA单克隆抗体，制备了OTA免疫阻抗传感器。该传感器对OTA的检测线性方程是y=194x+183.1（y是阻抗变化值ΔRet，x是OTA的浓度对数，即log[OTA]），线性范围0.5-20 ng/mL，最低检测限为0.35 ng/mL，对阴性样品加标回收率75％-101%。
　　2基于OTA的纳米抗体免疫阻抗传感器的研究
　　2.1采用EDC/NHS将抗OTA纳米抗体共价修饰于电极表面，通过优化EDC与NHS的反应浓度比为8:1，反应时间50 min，建立的Nb-免疫阻抗传感器，检测线性方程是y=224x+546.5（y是阻抗变化值ΔRet， x是OTA的浓度对数，即log[OTA]）），线性范围0.01-1 ng/mL，最低检测限0.005 ng/mL，阴性样品加标回收率92%-99%，该传感器检测啤酒样品的结果与ELISA检测结果基本一致。2.2实验结果表明修饰有纳米抗体的传感器灵敏度更好，有望继续深入研究，为以后推广快速检测做好技术储备。