乳腺癌患者尿液中酪氨酸及其代谢产物分析新方法研究

摘要

酪氨酸属于芳香氨基酸，在体内由苯丙氨酸羟化而来，在人体新陈代谢过程中起着重要的作用，是人体健康状况的重要参数。研究表明，酪氨酸的代谢紊乱不仅与氨基酸代谢疾病有关，而且与恶性肿瘤有一定的相关性。因此，建立简单、快速、灵敏的分析方法并且用于人体尿液中酪氨酸及其代谢产物含量的监测，对于一些疾病的普查、早期诊断、监测及预后评价具有极其重要的现实意义。然而，在已有的测定酪氨酸及其代谢产物的研究中，以血清中酪氨酸的代谢产物研究报道较多，而对尿液中酪氨酸的代谢产物研究介绍较少。本文应用色谱及其联用技术，系统地探讨了酪氨酸及其代谢产物分离分析条件，在此基础上，研究建立了尿液中酪氨酸及其多种代谢产物同时分析新方法，并应用于实际样品分析，取得了令人满意的效果。主要研究成果如下：
　　1.建立了气相色谱-串联质谱法同时测定人体尿液中的对羟苯基丙酸、尿黑酸和对羟苯基乳酸的分析新方法。尿液经乙腈除蛋白后，氮气吹干，加入硅烷化试剂（BS TFA+1％TMCS）衍生，离心后取上清液过0.22μm有机相滤膜后直接进样检测。采用HP-5MS毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25μm），流速为1.0 mL/min，在优化的色谱升温程序下进行分离。实验结果表明，对羟苯基丙酸、尿黑酸和对羟苯基乳酸的线性范围均为0.025?3.00 mg/L，线性相关系数在0.9993～0.9995之间，三种物质的加标回收率在94.50％?110.0％，相对标准偏差小于3.0％。该方法应用于人体尿液中对羟苯基丙酸、尿黑酸和对羟苯基乳酸的同时测定，结果令人满意。
　　2.建立了超高效液相色谱-荧光法测定人体尿液中的对羟苯基乳酸、对羟苯基乙酸以及对羟苯基丙酸的分析新方法。尿样经离心后取上清液过Generik C8/BCX固相萃取小柱净化，取洗脱液进行检测。采用ZO RBAX SB-C18快速分离柱，以50 mmo l/L乙酸-乙酸铵（p H=6.8，5 mmol/L四丁基溴化铵）：乙腈=95:5（V/V）为流动相，在流速为0.2 mL/min下分离，荧光检测波长为λex=277 nm，λem=316 nm。在优化的色谱条件下，对羟苯基乳酸、对羟苯基乙酸和对羟苯基丙酸的线性范围分别为0.05～4.0 mg/L、0.05～50 mg/L及0.1～4.0 mg/L。检出限分别为8.8×10-3 mg/L、4.8×10-3 mg/L及9.0×10-3 mg/L，健康人尿样中三种待测物在三个添加水平下的平均加标回收率在85.0%～120.0%之间，相对标准偏差在1.2%～3.1%之间。此方法用于尿液中三种物质的同时测定，结果令人满意。
　　3.建立了超高效液相色谱-串联质谱法测定尿液中的酪氨酸、多巴、对羟苯基乳酸、对羟苯基乙酸、尿黑酸、对羟苯基丙酸和酪胺的分析新方法。尿液被超纯水稀释两倍后离心，取上清液过0.22μm水系滤膜后直接进样。采用Shim-pack GIST C18分离柱，以乙酸-乙酸铵（20 mmol/L）：乙腈=95:5（V/V）为流动相，流速为0.2 mL/min，在优化的质谱条件下，七种组分的线性较好且相关系数在0.9992?0.9998之间，尿样中七种待测物在三个水平下的平均加标回收率在85.5%～112.0%之间，相对标准偏差在1.0%～5.0%之间。此方法简单快速，为今后酪氨酸及其代谢产物的研究提供了重要的方法学参考。

目录

声明

第一章 绪论

1.1 酪氨酸及其代谢产物的研究现状

1.2 乳腺癌的研究现状

1.3 本文研究的主要内容

第二章 气相色谱-串联质谱法测定人体尿液中的对羟苯基丙酸、尿黑酸和对羟苯基乳酸

2.1 引言

2.2 实验部分

2.3 结果与讨论

2.4 结论

第三章 超高效液相色谱-荧光法测定人体尿液中对羟苯基乳酸、对羟苯基乙酸和对羟苯基丙酸

3.1 引言

3.2 实验部分

3.3 结果与讨论

3.4 结论

第四章 超高效液相色谱-串联质谱法测定人体尿液中的酪氨酸及其代谢产物

4.1 引言

4.2 实验部分

4.3 结果与讨论

4.4 结论

第五章 小结

致谢

攻读硕士学位期间的研究成果

参考文献