987P菌毛蛋白FasG基因的克隆、表达及其单克隆抗体的制备

摘要

由产肠毒素大肠杆菌(ETEC)引起的仔猪、犊牛和羔羊腹泻是幼畜的一种最常见病之一，在世界范围造成严重的经济损失。ETEC菌株的致病前提是通过细菌表面的黏附素与宿主黏膜上皮细胞表面的相应受体结合，从而在该局部组织定居、繁殖、产生毒素或侵入深部损伤或破坏组织，引起疾病或造成隐性感染。而987P+ETEC又是引起仔猪腹泻病的重要病原菌之一，特别是在引起仔猪黄痢中发挥重要作用，因而对987P菌毛进行深入研究具有很强的理论及现实意义。 本研究根据己发表的E.coli987菌株FasG基因序列设计一对用于扩增不含信号肽的FasG基因的引物，采用PCR法以标准菌株E.coli987基因组为模板成功扩增出1119bp大小的片段，然后将该目的基因片段按正确的阅读框架克隆入pET-16b表达载体，结合酶切分析和核苷酸序列测定证明重组质粒构建的正确性。将构建好的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，于37℃情况下用IPTG诱导实现其在大肠杆菌中的高效表达，SDS-PAGE电泳结果显示表达的融合蛋白分子量约为40kDa. 采用复性纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠，利用淋巴细胞杂交瘤技术，经间接ELISA法筛选获得2株能稳定分泌针对987P菌毛蛋白亚单位FasG的单克隆抗体，分别命名为FasG-2C7和FasG-5D8,单抗腹水的ELISA效价分别为13log2和14log2。该单抗的成功制备为深入研究987P菌毛的确切致病机制、免疫诊断试剂的开发和基因工程疫苗的研制奠定了坚实的基础。

目录

符号说明

综述

研究一FasG基的克隆与表达

研究二FasG单克隆抗体的制备

参考文献

致谢