产肠毒素大肠杆菌(ETEC)987P菌毛fasG亚单位的克隆和表达

摘要

本文利用PCR技术从987P标准菌模板中扩增不含信号肽的fasG基因片段,将其克隆到表达载体pET28a(+),构建fasG的重组表达质粒pET28aG,经测序正确之后,导入大肠杆菌BL21(DE3),得到fasG的基因工程菌。经过IPTC诱导表达,诱导表达产物(40KD)表达量占到了全菌体蛋白的8％,经过超声波破碎分析,表达产物主要存在于不溶性的包涵体中,包涵体中表达产物的纯度达到50％。Western blotting分析表明,诱导表达产物即为目的蛋白。但是在本试验中没有能实现目的基因的高效表达,初步估计可能是由于存在mRNA的二级结构和目的基因编码区稀有密码子含量较高所造成的,在之后的试验中可以考虑采用更换载体和对目的基因序列进行优化等方案采提高表达量。