K88菌毛蛋白FaeG基因的克隆、表达及单克隆抗体的制备

摘要

由产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)引起的仔猪、犊牛和羔羊腹泻是幼畜的一种最常见病,在世界范围造成严重的经济损失.ETEC菌株的致病前提是通过细菌表面的黏附素与宿主黏膜上皮细胞表面的相应受体结合,从而在该局部组织定居、繁殖、产生毒素或侵入深部损伤或破坏组织,引起疾病或造成隐性感染.该研究根据已发表的F4菌株faeG基因序列设计引物,用PCR扩增法从六株标准F4菌株中扩增出0.8kb的faeG基因序列,通过测序和序列分析比较,所获核苷酸序列与已发表的标准F4菌株序列同源性大于95％,个别核苷酸差异可能由于菌株不同所致.将不含信号肽的faeG片段按正确的阅读框架克隆入pGEX-6p-1载体中的谷胱苷肽-G-转移酶(GST)基因下游,用IPTG诱导实现其在大肠杆菌中的表达.SDS-PAGE电泳和Western-blotting结果显示,表达的融合蛋白约为53kDa.将原核表达产物经复性和谷胱苷肽活化的Sepharose 4B亲和层析提纯后免疫BALB/c小鼠,获得针对FaeG的单克隆抗体3株,单抗腹水的ELISA效价为2<'11>,蛋白转印杂交结果表明此单抗仅与融合蛋白反应,与载体蛋白不反应,为ETEC对小肠上皮细胞的黏附机理研究、免疫诊断试剂和基因工程疫苗的研制打下了基础.

目录

符号说明

综述细菌黏附研究进展

前言

一、faeG基因的克隆与序列分析

二、FaeG基因的原核表达

三、FaeG特异单抗的制备

参考文献

致谢