鸭疫里默氏杆菌pfs基因的克隆表达及单克隆抗体制备

摘要

将鸭疫里默氏杆菌的pfs基因进行原核表达,重组蛋白经纯化后作为抗原免疫BALB/c小鼠.经过3次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,利用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株.通过间接ELISA法测定腹水效价、Western blot法检测其免疫反应性,并鉴定抗体的亚型.重组蛋白SDS-PAGE检测结果验证得到26 kDa Pfs蛋白,免疫小鼠后最终获得1株阳性杂交瘤细胞株,命名为2E2E6,为IgG1亚类,间接ELISA法检测腹水效价为1:64 000.Western blot结果表明制备的单克隆抗体具有良好的免疫反应性.本研究成功制备了Pfs的单克隆抗体,为进一步研究Pfs在鸭疫里默氏杆菌中的作用提供了参考.