生物转化制备人参皂苷C-K的研究

摘要

本论文对能转化生成人参皂苷Compound-K(C-K)的酶的性质进行了研究,并对人参皂苷C-K进行分离纯化。在本论文中,分别对细菌和真菌两种微生物进行发酵培养,提取出两种来源不同的酶,进而采用微生物酶转化法,通过改变人参二醇类皂苷(PPD)来转化生成人参皂苷C-K,并用高效液相色谱对其纯度进行确认。
　　 细菌Microbacteriumsp.GS514所产酶对Rb1等人参二醇类皂苷(PPD)降解过程是PPD→Rg3→Rh2,真菌sp.g48所生成的酶与Microbacteriumsp.GS514菌不同,对PPD人参皂苷降解途径为PPD→F2→C-K。因此,本论文采用真菌所产酶与PPD作用获得C-K。
　　 真菌sp.g48菌酶经过DEAE-Cellulose离子交换层析柱分离后,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定酶分子量为77KDa,不同于阿届研究生郑常龙从sp.848菌酶分子量82KDa。最佳酶反应时间为22h,最适温度为45℃,最适pH值5.0。其纯酶对于人参二醇类皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、F2等单体降解能力强,说明该酶为多种糖苷水解酶；但是对人参皂苷Rb1、Rd和F2可较大程度转化为人参皂苷C-K,而该酶对于人参皂苷Rc,转化生成人参皂苷C-K的程度较小。
　　 通过大量实验,人参二醇类皂苷与微生物产生酶反应后经过AB-8大孔吸附树脂处理得到C-K粗品,进而用硅胶柱分离得到部分纯品C-K和纯度为70-80％左右的C-K,其C-K的提纯方法有待于提高。

目录

文摘

英文文摘

第一章 文献综述

1.1 人参的分布、生长环境、形态、分类、及化学成分

1.1.1 人参的分布、生长环境及形态

1.1.2 人参的分类

1.1.3 人参的化学成分

1.2 人参皂苷的性质及命名

1.2.1 苷类

1.2.2 萜类(Terpenoids)

1.2.3 皂苷(saponins)

1.3 人参皂苷的化学结构特点及理化性质

1.3.1 人参皂苷的化学结构

1.3.2 人参皂苷的理化性质

1.4 人参皂苷的药理作用

1.4.1 人参皂苷的肿瘤抑制作用

1.4.2 人参皂苷的增强免疫力作用

1.4.3 人参皂苷的抗疲劳作用

1.4.4 几种人参皂苷的药理活性

1.5 改变人参皂苷的糖基而提高其活性方而的研究

1.5.1 化学法改变皂苷糖基

1.5.2 酶法改变皂苷糖基提高其活性

1.6 人参皂苷的分离及分析方法

1.6.1 常见的提取与纯化方法

1.6.2 人参皂苷酸催化水解及酶解转化

1.6.3 人参皂苷分离及分析方法

1.6.4 人参皂苷结构测定方法

1.7 人参皂苷结构改造方面的研究进展

1.7.1 人参皂苷的化学水解和转化研究进展

1.8 本论文主要研究内容

第二章 实验材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验办法

2.2.1 人参皂苷糖苷酶的分离纯化

2.2.2 人参皂苷糖苷酶纯度及分子量的测定

2.2.3 酶反应的最适条件的确定

2.2.4 酶法PPD转化为人参皂苷酶C-K

2.2.5 产物的分离

2.2.6 人参皂苷C-K的分离

2.2.7 高效液相色谱检测

第三章 结果与讨论

3.1 产酶菌的筛选以及培养基的确定

3.2 酶蛋白的分离提纯

3.2.1 DEAE-纤维素柱分离

3.2.2 酶的纯度及其分子量

3.3 生成C-K酶的性质

3.3.1 对Rb1,Rb2,Rc,Rd,F2等人参二醇类不同单体皂苷糖基的水解

3.3.2 最适酶反应条件的确定

3.4 从人参二醇类皂苷PPD大量制备人参皂苷C-K

3.4.1 酶反应制备C-K

3.4.2 大孔树脂的分离除杂

3.4.3 人参皂苷C-K的分离与提纯

第四章 结论

参考文献

致谢