硒对大鼠金黄色葡萄球菌性乳腺炎抗氧化损伤作用的研究

摘要

硒具有广泛的生物学作用，但目前有关硒对乳腺炎发展的影响研究较少。本试验通过对泌乳期大鼠，采用人工接种金黄色葡萄球菌的方法，建立乳腺炎模型，观察大鼠的临床症状、血液学变化、脏器指数、乳腺及相关组织中与抗氧化有关酶的活性以及乳腺组织中相关抗氧化因子的基因mRNA表达情况。本试验选取体重为200～250g的健康同龄妊娠待产Wistar大鼠140只，随机分为4组，每组35只。试验组在饮水中添加亚硒酸钠，配制成不同浓度的亚硒酸钠溶液，分别为:低剂量补硒组(0.2 mg/L)，中剂量补硒组(0.4 mg/L)和高剂量补硒组(0.6 mg/L);对照组(0.0 mg/L)母鼠饮用清洁水。每只孕鼠于分娩后96 h经第四对乳头管注入2×107cfu/mL的金黄色葡萄球菌的菌液0.1mL/侧，分别在注菌前(0 h)和注菌后6h、12h、24 h、48 h、72 h和96 h采集血液、乳腺、肝脏、胸腺和脾脏，用于测定脏器指数、血常规、血生化、相关抗氧化酶活性及乳腺组织中GPx1、GPx2、GPx3、GPx4、SOD1和SOD2的基因mRNA表达。试验结果如下:
　　1、注菌后各组大鼠均表现出精神沉郁、饮食欲下降，乳腺充血肿胀;血液中的Gran、WBC、AST总体呈现显著“升高—降低”的趋势，峰值出现在注菌后6h至24 h;Lymph、ALT（高剂量组除外）、ALP总体呈现显著“降低—升高—降低”的趋势，谷值出现在注菌后6h至24 h;Mon、RBC、PLT、CREA、BUN、TP、TBIL、DBIL和IDBIL除个别时间点外总体无显著变化。总体上，补硒能降低乳腺炎大鼠的胸腺和脾脏指数，部分时间点差异显著（P＜0.05）;除个别时间点外能降低或显著降低（P＜0.05）血液中Gran、WBC、PLT、ALT、AST、ALP、TBIL、DBIL和IDBIL;对血液中Lymph、Mon、RBC、CREA、BUN和TP除个别时间点外无显著影响。高剂量组在注菌后6h至24 h能提高或显著提高（P＜0.05）血液中PLT、ALT、CREA和BUN。
　　2、注菌后各组大鼠肝脏中GSH-Px、T-AOC、T-SOD和MDA的数值总体呈现“升高—降低”的趋势，部分存在差异性（P＜0.05）;乳腺组织中GSH-Px、T-AOC、T-SOD数值总体呈现“降低—升高”的趋势，MPO和MDA呈现“升高—降低”的趋势，部分存在差异性（P＜0.05）;血清中T-SOD和T-AOC总体呈现“降低—升高”的趋势，GSH-Px、MPO和MDA总体呈现“升高—降低”的趋势，部分存在差异性(P＜0.05)。补硒能升高或显著升高（P＜0.05）乳腺炎大鼠肝脏和血清中GSH-Px、T-SOD和T-AOC以及乳腺中的GSH-Px;显著降低乳腺组织中的T-AOC（12h至48 h）和T-SOD（48h至96 h）（P＜0.05）;除个别时间点外，总体提高或显著提高（P＜0.05）乳腺中的MPO，对肝脏、乳腺和血清中的MDA总体无显著影响，但高剂量组的MDA总体高于其他各组。
　　3、注菌后除个别时间点外，乳腺组织中GPx1、GPx3、GPx4和SOD1的mRNA表达总体显著降低(P＜0.05)，呈现“降低—升高”的趋势;GPx2和SOD2总体呈现“升高—降低”的趋势，峰值出现在注菌后12h至48 h，差异显著（高剂量组12h除外）(P＜0.05)。除个别时间点外，补硒对乳腺组织中GPx1和GPx3的mRNA表达总体上无显著影响;升高或显著升高（P＜0.05）GPx2（注菌后12h至48 h）和GPx4（注菌后48 h至96 h）的mRNA表达量;降低或显著降低（P＜0.05）SOD1和SOD2的mRNA表达量。
　　由上述试验结果可知，金黄色葡萄球菌急性感染大鼠乳腺后，可引发炎症反应，造成血液中Gran和WBC显著上升，并进一步对肝脏造成一定损伤，AST活性升高。补硒能增加机体的抗氧化功能，提高炎症中后期乳腺组织中GPx2和GPx4的mRNA表达，以及提高肝脏、乳腺和血清中GSH-Px的活性，从而减轻乳腺组织的损伤，抑制机体的炎性反应或病情发展，延迟Gran和WBC的峰值出现时间或降低其数量，降低血液中PLT、ALT、AST、ALP、TBIL、DBIL和IDBIL指标值，减轻对肝脏的损伤。亚硒酸钠对乳腺炎大鼠氧化性损伤的保护，主要是通过提高全身性（肝脏、血液）抗氧化能力来发挥作用的，且本试验的中剂量补硒组的抗氧化损伤作用总体上更优。

目录

摘要

英文缩写词汇表

硒对大鼠金黄色葡萄球菌性乳腺炎抗氧化损伤作用的研究综述

第一章 氧化性损伤的研究进展

1 氧化性损伤及产生原因

2 氧化性损伤的机制

3 炎症与氧化性损伤的相互作用

4 氧化性损伤的预防与治疗

第二章 亚硒酸钠的生物学意义

1 硒在动物体内的含量与分布

2 亚硒酸钠的吸收与代谢

3 亚硒酸钠的生物学作用

5 硒与基因表达

6 亚硒酸钠的毒性作用

7 课题的研究意义

试验一 硒对金黄色葡萄球菌性乳腺炎大鼠免疫器官的脏器指数、血常规和血生化指标的影响

1 材料

1．1 主要仪器

1．2 试剂

2 试验方法

2．1 试验动物与分组

2．2 金黄色葡萄球菌的培养与计数

2．3 人工注菌的方法

2．4 样本采集

2．5 脾脏与胸腺脏器指数、血常规和血生化的测定

2．6 数据处理

3 结果

3．1 临床观察结果

3．2 脏器指数检测结果

3．3 血常规检测结果

3．4 血液生化检测结果

4 讨论

试验二 硒对金黄色葡萄球菌性乳腺炎大鼠肝脏、乳腺和血清抗氧化能力的影响

1 材料

1．1 试验动物

1．2 主要仪器

1．3 试剂

2 试验方法

2．1 样本的采集

2．2 乳腺、肝脏组织匀浆

2．3 蛋白浓度测定

2．4 数据处理

3 结果

3．1 肝脏中抗氧化指标变化

3．2 乳腺组织中抗氧化指标变化

3．3 血清中抗氧化指标变化

4 讨论

试验三 硒对金黄色葡萄球菌性乳腺炎大鼠乳腺中相关因子的基因表达的影响

1 材料

1．1 试验动物

1．2 主要仪器

1．3 试剂

2 试验方法

2．1 样本采集

2．2 荧光定量PCR方法检测相关基因的mRNA表达

2．3 数据处理

3 结果

3．1 总RNA提取结果

3．2 引物特异性检测

3．3 乳腺组织中相关因子的基因表达变化

4 讨论

全文结论

参考文献

致谢

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