清肺止咳合剂对鸡传染性支气管炎的治疗研究

摘要

鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis，IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus，IBV)引起的一种急性、高度接触性呼吸道传染病，被认为是集约化养鸡场的重要疫病之一。该病广泛分布于世界各地，威胁着养鸡业的发展，常常造成严重的经济损失。清肺止咳合剂是本实验室与某中兽药企业合作研发，用于防治鸡传染性支气管炎的新中兽药，其处方如下:板蓝根、黄芩、石膏、桔梗、紫菀、北豆根、硼砂等。该方以清热化痰，止咳平喘，开窍醒神为主要功效。为了评价其对IBV的治疗效果，我们开展了鸡胚内抗病毒实验、人工模型病例的临床治疗试验和CEK细胞上抗病毒实验，来探讨清肺止咳合剂对鸡传染性支气管炎的治疗及抗病毒机制，并为申报农业部新中兽药提供实验依据。
　　本文主要从以下几方面进行论述：
　　试验一:清肺止咳合剂在鸡胚中对IBV作用研究
　　为了研究清肺止咳合剂对IBV的作用，开展鸡胚内抗病毒实验。取80枚9日龄SPF鸡胚随机分为8组，即空白对照组、攻毒对照组、清肺止咳合剂感染前给药组、清肺止咳合剂感染后给药组、清肺止咳合剂与感染同时给药组、利巴韦林先给药组、利巴韦林后给药组、利巴韦林与感染同时给药组。各组鸡胚经尿囊腔注射给药和接种IBV后，连续观察8d。观察、记录各组鸡胚死亡数、死亡时间、存活数，以及鸡胚是否存在发育受阻、胚体萎缩等特征性病变，并收取存活胚收集尿囊液进行IBV荧光定量RT-PCR测定。结果显示:阴性对照组所有胚都存活，发育正常;攻毒对照组所有存活胚均出现不同程度的发育受阻、胚体萎缩、卵黄囊缩小和表皮水肿等病变;各给药组也出现不同程度的发育受阻等病变，但病变程度较轻，且各给药组的胚重和胚长均极显著或显著高于攻毒对照组(P＜0.01或P＜0.05);各给药组的病毒mRNA表达量极显著低于攻毒对照组(P＜0.01)。表明清肺止咳合剂在鸡胚内对IBV有抑制作用，优于或等效于利巴韦林的抗IBV作用，尤其是攻毒同时或攻毒后给药的作用效果更好。
　　试验二:清肺止咳合剂治疗IBV临床试验
　　为了观察清肺止咳合剂对鸡传染性支气管炎病的治疗作用，选用180只10日龄SPF来航鸡雏鸡进行临床动物实验，按体重随机分为阴性对照组、传支阳性对照组、阳性药物对照组和清肺止咳合剂低、中、高3个剂量组，每组30只。攻毒24h后采用混饮方式给药，每天观察2次至10d、记录各组的发病情况、症状分值、死亡数、观察结束时存活鸡扑杀病理分值和用药5d后泄殖腔排毒量等指标。结果显示清肺止咳合剂高、中剂量组的治愈率分别为60.0％和56.7％，显著高于阳性药物对照组的36.7％和清肺止咳合剂低剂量组的30.0％(P＜0.05)，且极显著高于传支阳性对照组的13.3％(P＜0.01）;清肺止咳合剂高、中剂量组86.7％的总有效率亦显著高于传支阳性对照组的40.0％和清肺止咳合剂低剂量组的56.7％。表明高、中剂量清肺止咳合剂和阳性药物均能有效治疗鸡传染性支气管炎病，且高、中剂量组的效果明显优于阳性药物组，其作用机理可能是通过抑制鸡体内IBV的复制增殖，更详细机理有待进一步探讨。
　　试验三:清肺止咳合剂在细胞上对IBV作用研究
　　为了研究清肺止咳合剂抗IBV的作用机制，以CEK细胞为载体，利巴韦林为阳性对照药，将清肺止咳合剂分别作用于IBV在CEK细胞上的吸附期和增殖复制期，采用荧光定量RT-PCR试验和间接免疫荧光试验(IFA)，分析不同时间段内IBV在CEK细胞上的吸附、增殖特性，来探讨不同浓度(14mg/ml、7mg/ml、3.5mg/ml)的清肺止咳合剂对CEK细胞的吸附、增殖的影响。结果显示约140min时IBV对细胞的吸附量达到饱和，IBV感染后约48h在细胞内的增殖量达到最大;清肺止咳合剂吸附抑制组和增殖抑制组的mRNA表达量都极显著低于攻毒对照组(P＜0.01)，但显著高于利巴韦林组(P＜0.05);证明清肺止咳合剂能有效阻止IBV在CEK细胞上的吸附、侵入和抑制其在细胞内复制增殖过程，可能是其有效防治鸡传染性支气管炎的作用机理。

目录

摘要

第一篇 文献综述

1 传染性支气管炎(IB)研究进展

1．1 IBV病原学

1．2 IBV流行病学

1．3 IB临床症状

1．4 IB病理变化

1．5 IBV培养方式

1．6 IB检测及诊断

1．7 IB的防控现状

2 中草药治疗IB研究进展

2．1 IBV致病的中兽医理论

2．2 抗IBV的中草药特点

2．3 中草药抗IBV的作用机制

2．4 中草药对IB的防治现状

3 研究的目的和意义

第二篇：研究论文

1 材料与方法

2 结果分析

3 讨论

附图

实验二：清肺止咳合剂治疗IB的临床试验

1 材料与方法

2 结果

3 讨论

附图

实验三：清肺止咳合剂在CEK细胞上对IBV的作用研究

1．材料和法方

2 结果

3 讨论

全文结论

参考文献

致谢

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